Technika ex vivo indukowania śmierci neuronów za pomocą limfocytów T CD8+ specyficznych dla oligodendrocytów

Oligodendrocyty, które są wyspecjalizowanymi komórkami ośrodkowego układu nerwowego, tworzą osłonki mielinowe wokół neuronów. Mielina izoluje akson i ułatwia szybkie przewodzenie impulsów elektrycznych. Demielinizacja – zniszczenie mieliny – prowadzi do śmierci neuronów.

Aby zbadać śmierć neuronów, weźmy transgeniczny mózg myszy umocowany na płytce wibratomowej. Zanurz mózg w lodowatym buforze, zachowując integralność strukturalną podczas cięcia.

Za pomocą wibratomu uzyskaj cienkie przekroje koronalne. Przenieś skrawki do studzienki hodowlanej zawierającej odpowiednią pożywkę.

Oligodendrocyty w mózgu transgenicznej myszy wyrażają obcy antygen, który jest wyświetlany na powierzchni komórki za pośrednictwem głównego kompleksu zgodności tkankowej.

Dodaj roztwór aktywowanych limfocytów T CD8 + - specyficznych dla obcego antygenu - na skrawki i inkubuj.

Receptor limfocytów T wiąże się ze swoim antygenem wyświetlanym na oligodendrocytach. Cząsteczka kostymulująca wiąże się ze swoim ligandem. Wiązanie inicjuje kaskadę sygnalizacyjną wewnątrz limfocytu T, powodując uwalnianie perforyny i granzymów - mediatorów cytotoksycznych.

Perforyna tworzy pory w błonie oligodendrocytów, przez które gr