JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 wyświetleń • 2:49 min • July 8th, 2025
Weź znieczuloną mysz z wydepilowanymi uszami i nałóż testowy antygen - hapten zmieszany z odpowiednim roztworem nośnika - na odsłoniętą skórę. Roztwór podłoża ułatwia penetrację haptenu przez najbardziej zewnętrzną warstwę naskórka, aby dotrzeć do leżącej poniżej skóry właściwej.
Hapten wiąże się z białkami skóry, tworząc immunogen rozpoznawany przez komórki prezentujące antygen lub APC. Po pochłonięciu APC przetwarzają i wyświetlają immunogen na swojej powierzchni.
APC migrują do węzłów chłonnych, prezentując immunogen naiwnym limfocytom T i aktywując je. Aktywowane komórki różnicują się w zapoczątkowane limfocyty T pamięci - podzbiór których migruje do skóry.
Po ponownej ekspozycji na hapteny, APC prezentują immunogen do przygotowanych limfocytów T, indukując uwalnianie cytokin prozapalnych.
Cytokiny pobudzają keratynocyty i komórki tuczne do uwalniania chemokin, które wiążą się z krążącymi neutrofilami, ułatwiając ich wynaczynienie. Wynaczynione neutrofile docierają do miejsca zapalenia.
Cytokiny aktywują neutrofile do produkcji enzymów proteolitycznych i reaktywnych form tlenu – powodując uszkodzenie tkanek i wzmacniając stan zapalny.
Na początek znieczulij mysz za pomocą dootrzewnowego wstrzyknięcia koktajlu znieczulającego i potwierdź odpowiednią sedację za pomocą testu szczypania palca u nogi. Następnie nałóż krem do depilacji na grzbietową powierzchnię obu uszu. Zetrzyj go w ciągu minuty i umyj skórę wodą.
Zmierz grubość ucha, w którym zostały wykonane aplikacje, za pomocą mikrometru. Później umieść mysz w jej własnej klatce po wyzdrowieniu ze znieczulenia i pozwól myszy odpocząć przez co najmniej trzy dni przed dalszymi badaniami.
Po trzech dniach ponownie znieczul mysz i ponownie zmierz grubość ucha, aby upewnić się, że nie jest podrażniona. Następnie nałóż 12,5 mikrolitra 1,25% oksazolonu po każdej stronie prawego ucha i nałóż 12,5 mikrolitra roztworu acetonu i oliwy z oliwek po każdej stronie lewego ucha.
Jak zawsze, obserwuj, jak mysz wraca do zdrowia po znieczuleniu. 24 godziny później ponownie zmierz grubość ucha w znieczuleniu, aby upewnić się, że wystąpiło zapalenie skóry wywołane oksazolonem.