JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:00 min. • July 8th, 2025
Weźmy znieczuloną mysz zmodyfikowaną do ekspresji białka fluorescencyjnego w neutrofilach. Ogol grzbiet i utwórz okrągłe cięcie. Wytnij przeciętą skórę, aby odsłonić powięź - warstwę tkanki łącznej pod spodem.
Weź strzykawkę zawierającą zawiesinę Staphylococcus aureus – bakterii chorobotwórczej – genetycznie zmodyfikowanej w celu uzyskania bioluminescencji. Wstrzyknąć zawiesinę między powięź a leżącą pod nią tkankę, powodując miejscowe zakażenie rany.
Receptory rozpoznawania wzorców na komórkach zrębu w powięzi rozpoznają wzorce molekularne związane z patogenami na bakteriach. To wiązanie indukuje uwalnianie cytokin prozapalnych i chemoatraktantów - powodując stan zapalny.
Chemoatraktanty rekrutują krążące neutrofile w miejscu infekcji. Napływające neutrofile pochłaniają bakterie w fagosomie, który łączy się z ziarnistościami cytoplazmatycznymi, powodując uwalnianie peptydu przeciwdrobnoustrojowego.
Oksydaza NADPH - kompleks enzymatyczny - gromadzi się na błonie fagosomu i wytwarza reaktywne formy tlenu lub ROS. Peptydy przeciwdrobnoustrojowe i ROS powodują degradację bakteryjną.
Jako przeciwreakcję bakterie wydzielają czynniki wirulencji, które przenikają przez błonę neutrofili, powodując lizę komórek. Bakterie uwalniają również enzymy do odkładania fibryny, aby uniknąć fagocytozy.
Odpowiedź immunologiczna prowadzi do ropnia – kapsułki fibrynowej zawierającej komórki bakteryjne, neutrofile i martwe komórki.
Rejestruj fluorescencję neutrofili i bioluminescencję bakterii, aby zobrazować interakcję bakteria-neutrofile.
W celu zaszczepienia gronkowcem złocistym napełnij strzykawkę insulinową o rozmiarze 28 50 mikrolitrami przygotowanego bioluminescencyjnego inokulantu bakteryjnego i palcem pociągnij skórę właściwą rannego zwierzęcia na bok. Trzymając strzykawkę prawie równolegle do tkanki, powoli wkładaj strzykawkę do tkanki, aż do momentu wyczucia nagłego spadku oporu, wskazującego na przebicie powięzi.
Z igłą umieszczoną w środku rany, powoli dostarcz całą objętość inokulantu. Upewnij się, że inokulant tworzy pęcherzyk w środku rany z minimalnym wyciekiem lub dyspersją i powoli wyjmij strzykawkę ze zwierzęcia. Następnie należy umieścić zwierzę z powrotem w klatce z ciepłem i monitorowaniem, aż do pełnego wyzdrowienia.