JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:52 min. • July 8th, 2025
Aby wywołać ogólnoustrojowe zapalenie - rozległą reakcję zapalną, zacznij od umieszczenia znieczulonej myszy grzbietową stroną do góry. Weź strzykawkę zawierającą emulsję prątkową z magazynów antygenów prątków i adiuwantów — zlokalizowany zbiornik oleju mieszaniny antygenu i adiuwanta.
Przekłuć warstwy naskórka i skóry właściwej myszy i wstrzyknąć emulsję z adiuwantem antygenowym podskórnie proksymalnie do pachwinowego węzła chłonnego. Po wstrzyknięciu magazyn w sposób ciągły uwalnia antygeny do otaczającej tkanki, zapewniając przedłużoną ekspozycję antygenów na układ odpornościowy.
Komórki prezentujące antygen lub APC w tkance oddziałują z wstrzykniętymi antygenami prątków, internalizują je i przetwarzają w peptydy. Peptydy te są następnie prezentowane na powierzchni APC za pomocą głównych kompleksów zgodności tkankowej, wyzwalając uwalnianie cytokin i chemokin prozapalnych.
Proces ten generuje miejscowy stan zapalny i wyzwala otwarcie naczyń limfatycznych, umożliwiając wnikanie komórek odpornościowych, w tym APC przenoszących antygen, do układu limfatycznego i docierających do pachwinowego węzła chłonnego.
W węzłach chłonnych receptory limfocytów T pomocniczych komórek T oddziałują z antygenami na powierzchni APC i ulegają aktywacji. Aktywowane limfocyty T uwalniają cytokiny prozapalne, które przemieszczają się przez naczynia limfatyczne i są uwalniane do różnych innych tkanek.
Uwolnione cytokiny prozapalne przyciągają komórki odpornościowe do tych tkanek, wywołując ogólnoustrojowy stan zapalny.
Aby rozpocząć, odkręć korpus przetwornika sonicznego i wyczyść sondę wacikiem nasączonym 70% alkoholem. Następnie włącz sonikator i ustaw moc na 4, obracając pokrętło regulacji mocy.
Następnie, aby wytworzyć drobną zawiesinę Mycobacterium tuberculosis H37Ra w PBS, zanurz końcówkę sondy w proszku prątków zawierającym PBS. Sonikuj mieszaninę na lodzie przez 30 sekund, a następnie zatrzymaj się na 30 sekund i powtarzaj w sumie przez 5 minut, aby w pełni rozproszyć proszek do równomiernej zawiesiny bez podgrzewania płynu. Następnie dodaj 2,5 mililitra niekompletnego adiuwanta Freunda do mieszaniny i powtarzaj proces sonikacji na lodzie, aż emulsja utworzy konsystencję przypominającą pastę do zębów.
Do wstrzyknięcia podskórnego należy załadować od 200 do 300 mikrolitrów emulsji prątków do strzykawki o pojemności 1 mililitra. Usunąć powietrze ze strzykawki i kontynuować napełnianie strzykawki, z przerywanym odwracaniem i stukaniem, aż do napełnienia.
Następnie należy umieścić zastrzyki podskórne na grzbietowej powierzchni bioder lub na brzusznej powierzchni nóg proksymalnie do obszaru pachwinowych węzłów chłonnych 6-10-tygodniowej, znieczulonej myszy C57Black/6J. Ostrożnie wprowadzić igłę, uważając, aby nie przeniknąć do mięśnia, i wstrzyknąć 50 mikrolitrów emulsji w przestrzeń podskórną. Nie należy natychmiast wyjmować igły, aby umożliwić pełne wstrzyknięcie gęstej emulsji.