Technika zgłębnika dożołądkowego w kontrolowanym zakażeniu Helicobacter u myszy

Aby ustalić model infekcji Helicobacter pylori, zacznij od znieczulonej, wolnej od patogenów myszy. Mocno przymocuj mysz, aby zminimalizować ruch podczas zabiegu.

Weź strzykawkę wypełnioną zawiesiną bakteryjną. Podłączyć cewnik polietylenowy do igły strzykawki w celu podania przez zgłębnik żołądkowy — technikę dostarczania zawiesiny bezpośrednio do żołądka.

Włóż cewnik do środka otwartych ust, aby uzyskać dostęp do przełyku, mięśniowej rurki łączącej usta z żołądkiem. Delikatnie przeprowadź cewnik przez przełyk, aż dotrze do żołądka, a zawiesinę bakteryjną dostarczyć bezpośrednio do jej kwaśnego środowiska.

Zaszczepione bakterie wydzielają ureazę, enzym, który przekształca mocznik w amoniak i dwutlenek węgla. Amoniak podnosi pH żołądka, neutralizując kwasowość i umożliwiając bakteriom przetrwanie.

Bakterie te wykorzystują wici do przechodzenia przez ochronną warstwę śluzu, co pozwala im dotrzeć do nabłonka żołądka, gdzie przylegają do komórek za pomocą białek adhezynowych. Po przyczepieniu bakterie te uwalniają czynniki wirulencji, które przerywają ścisłe połączenia między komórkami nabłonka.

To zaburzenie strukturalne sprzyja inwazji bakterii i kolonizacji w głębszych tkankach, ostatecznie ustanawiając kontrolowaną infekcję w żołądku.

Dodaj zawiesiny bakteryjne do 15-mililitrowych probówek polistyrenowych i za pomocą plastikowej pętli przenieś jedną kroplę o pojemności od 10 do 20 mikrolitrów z każdej kultury na indywidualne szklane szkiełka mikroskopowe. Następnie oceń żywotność i ruchliwość bakterii pod mikroskopią z kontrastem fazowym w 100-krotnym powiększeniu.

Szczepionkę H. pylori należy stosować tylko wtedy, gdy większość bakterii ma kształt pałeczek. Szczepionka H. felis powinna przede wszystkim zawierać bakterie w kształcie spirali i ładować inokulację do indywidualnych jednorazowych strzykawek o pojemności 1 mililitra. Wyposaż każdą strzykawkę w igłę o rozmiarze 23 i użyj plastikowej folii parafinowej do przymocowania jednorazowego cewnika polietylenowego do każdej igły.

Następnie ręcznie przytrzymuj 6- do 8-tygodniową mysz wolną od specyficznych patogenów i Helicobacter za kark szyi i ogona i wprowadź jeden cewnik do środka otwartej szczęki. Prowadź cewnik w kierunku doogonowym w kierunku przełyku, przedłużając szyję myszy, aby umożliwić łatwy dostęp do żołądka przez przełyk i z dala od tchawicy, aż większość lub całość cewnika przestanie być widoczna i wyczuwalny będzie opór. Następnie dostarcz co najmniej 1 x 10⁵ bakterii, aby zapewnić optymalną kolonizację w patologii choroby.