JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:32 min. • July 8th, 2025
Weź znieczulonego samca myszy i wprowadź cewnik do jej narządów płciowych.
Wprowadź bakterie urochotwórcze do cewki moczowej. Wewnątrz dróg moczowych bakteria przyczepia się do komórki nabłonka moczowego.
Interakcja białek powierzchniowych bakterii z białkami błony komórkowej gospodarza indukuje przegrupowanie cytoszkieletu, powodując ciasne owinięcie błony komórkowej gospodarza wokół bakterii za pomocą mechanizmu zamka błyskawicznego.
Bakteria jest następnie internalizowana w pęcherzyku zamkniętym w błonie. Wewnątrz pęcherzyka bakteria wytwarza monomery toksyny α-hemolizyny, które łączą się, tworząc kompleks porów w błonie pęcherzykowej.
Bakteria ucieka przez kompleks porów do cytoplazmy komórki gospodarza, gdzie replikuje się, tworząc wewnątrzkomórkowe społeczności bakteryjne lub IBC. IBC to gęste, przypominające biofilm struktury w komórkach gospodarza, chronione przed bezpośrednim atakiem komórek odpornościowych obecnych w przestrzeni zewnątrzkomórkowej.
Gdy bakterie uropatogenne dojrzewają w IBC, ostatecznie opuszczają komórki gospodarza, aby zainfekować sąsiednie komórki, powodując infekcje dróg moczowych.
Aby zaszczepić samce myszy, umieść dwa kleszcze kciukowe czaszkowo i doogonowo do zewnętrznych narządów płciowych myszy. Cofnij napletek, aby w pełni odsłonić żołądź prącia. Następnie, gdy penis znajdzie się na zewnątrz, zwolnij kleszcze do kciuków. Zmień położenie kleszczy, aby ustabilizować wystającego penisa prostopadle do zwierzęcia, przytrzymując narząd delikatnie, ale mocno. Następnie przez mały otwór w końcówce ujścia cewki moczowej ostrożnie wprowadź cewnik i delikatnie wprowadź go do penisa za pomocą kleszczy, aby delikatnie utrzymać napięcie.
Gdy piasta cewnika zetknie się z czubkiem prącia, bardzo powoli dozuj 50 mikrolitrów inokulum, zachowując pozycję prącia. Zwróć uwagę na jakość wkraplania zgodnie z wcześniej ustaloną oceną jakości wkraplania, taką jak ta pokazana tutaj. Powoli cofaj cewnik przez 5 sekund, aby zapobiec wyciekowi inokulum. Umieść mysz w klatce w pozycji leżącej. Zwierzę powinno zacząć wracać do zdrowia po 30 do 45 minutach od podania środka znieczulającego.