JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:26 min. • July 8th, 2025
Zacznij od naczynia hodowlanego zawierającego liść ryżu z małymi ranami, odsłaniającymi leżący pod spodem naskórek.
Zastosuj roztwór nawilżający zawierający Tween-20, tworząc środowisko sprzyjające rozwojowi grzybów.
Umieść grzybnię Magnaporthe grisea, składającą się z konidioforów z konidiami - zarodnikami grzybów rozrodczych, nad zranionym miejscem.
Inkubuj liść w wilgotnej komorze w warunkach fotoperiodycznych, aby pobudzić wzrost grzybów.
Podczas inkubacji konidiofory uwalniają zarodniki, które przylegają do odsłoniętego naskórka, tworząc rurki rozrodcze.
Rurka zarodkowa różnicuje się w appressorium w kształcie kopuły, które generuje wysokie ciśnienie turgoru, tworząc ostrą strzępkę - lub kołek penetracyjny.
Kołek penetracyjny wydziela enzymy rozkładające ścianę komórkową, ułatwiając jego wejście do komórki naskórka i różnicowanie się w inwazyjne strzępki w celu pobrania składników odżywczych.
Strzępki te rosną i rozprzestrzeniają się w komórkach naskórka poprzez plazmodesmy - kanały łączące komórki i ustanawiające infekcję.
Grzyb wydziela toksyny, powodując martwicę komórek i tworzenie się zmian w pobliżu zranionego miejsca na liściach, co wskazuje na infekcję grzybiczą.
Za pomocą anatomicznej igły zeskrob trzy rany o długości od 2 do 3 centymetrów w głównych żyłach oderwanych liści ryżu. Umieść zeskrobane liście na wykałaczkach i spryskaj je roztworem Tween-20. Następnie wytnij czop grzybni o wymiarach 1/2 na 1/2 centymetra z płytek OTA zawierających każdy szczep M griseus. Umieść zatyczki na zranionych liściach i inkubuj je w wilgotnej komorze w temperaturze 25 stopni Celsjusza przez 3 do 8 dni.
Po okresie inkubacji należy zbadać i ocenić zmiany chorobowe zgodnie z systemem punktacji dostarczonym przez Międzynarodowy Instytut Badań nad Ryżem. Na koniec sfotografuj chore liście, aby ocenić zakaźność badanych szczepów.