Wkraplanie dooskrzelowe Streptococcus pneumoniae w immunokompetentnych modelach gryzoni

Zaopatrz się w sterylne urządzenie do intubacji składające się z metalowej kaniuli z rurką polietylenową połączoną z metalową igłą.

Podłączyć strzykawkę zawierającą Streptococcus pneumoniae do igły i napełnić rurkę.

Następnie umieść znieczulonego szczura immunokompetentnego w pozycji leżącej.

Włóż wolny koniec metalowej kaniuli do pyska szczura. Przesuń go do tchawicy w kierunku lewego oskrzela i w dół lewego płuca na odpowiednią głębokość.

Przesuń rurkę do końca kaniuli i wkraplaj zawiesinę bakteryjną do lewego płata płuca.

Kapsułka bakteryjna i enzymy związane z powierzchnią zapobiegają uwięzieniu bakterii w śluzie. Ponadto Streptococcus pneumoniae przyczepiają się do receptorów powierzchniowych na komórkach nabłonka oskrzeli, ułatwiając endocytozę i uwalnianie na powierzchnię podstawno-boczną.

Bakterie wydzielają toksyny, które uszkadzają komórki nabłonkowe i bariery, wywołując odpowiedź immunologiczną.

Jednak Streptococcus pneumoniae opracował strategie unikania odpowiedzi immunologicznej gospodarza i wywoływania infekcji płuc.

Umieść czystą jednorazową matę na powierzchni roboczej, w pobliżu łaźni wodnej.

Aby przygotować powierzchnię roboczą i urządzenie do intubacji, najpierw wysterylizuj metalową kaniulę i rurkę polietylenową zgodnie z protokołem tekstowym, a następnie przenieś je w szklanej rurce do przechowywania na powierzchnię roboczą. Następnie zdejmij nasadkę z rurki do przechowywania i wsuń koniec uchwytu kaniuli do otwartego końca tuby. Za pomocą sterylnych kleszczy wyjmij jeden odcinek rurki polietylenowej ze zlewki i włóż ją przez wnętrze sterylnej metalowej kaniuli, upewniając się, że porusza się swobodnie. Umieść znak prowadzący w określonym miejscu za pomocą nieusuwalnego pisaka.

Następnie załóż sterylną jednorazową igłę o rozmiarze 25 na wolnym końcu rurki polietylenowej, wsuwając igłę na kilka milimetrów w rurkę. Następnie użyj sterylnej soli fizjologicznej, aby napełnić świeżą jednorazową strzykawkę o pojemności 1 mililitra. Przymocować strzykawkę do igły umieszczonej na rurki polietylenowej i przepłukać całą objętość soli fizjologicznej przez rurkę.

Wyrzuć zużytą strzykawkę do pojemnika na ostre przedmioty. Następnie napełnij nową sterylną jednorazową strzykawkę o pojemności 1 mililitra inokulum na bazie agaru z łaźni wodnej. Ponownie zamocuj igłę i rurkę o rozmiarze 25 i przepłucz agar przez rurkę, naciskając tłok, aż rurka zostanie całkowicie wypełniona agarem.

Po znieczuleniu szczura zgodnie z protokołem tekstowym należy ułożyć zwierzę w pozycji leżącej na jednorazowej macie, z głową skierowaną w prawo i ogonem skierowanym w lewo. Następnie włóż wolny koniec metalowej kaniuli do pyska zwierzęcia. Obróć kaniulę tak, aby wolny koniec był ustawiony pod kątem do góry i delikatnie wsuń ją do tchawicy, ostrożnie omijając struktury krtani lekkim ruchem skręcającym.

Potwierdź wprowadzenie do tchawicy, a nie do przełyku, delikatnie przesuwając kaniulę lekko do przodu i do tyłu kilka razy, jednocześnie używając lewego palca wskazującego do dotykania pierścieni tchawicy.

Aby zapewnić intubację do tchawicy, a nie do przełyku, należy lekko przesunąć kaniulę do przodu i do tyłu i wyczuć grzbiety. Jeśli kaniula gładko przesuwa się w dół gardła, a wypukłości nie są wyczuwalne, wyjmij urządzenie i spróbuj ponownie.

Gdy kaniula dotrze do rozwidlenia, w którym tchawica rozdziela się na lewe i prawe oskrzel, wykonaj lekki ruch skręcający w kierunku lewej strony zwierzęcia, aby upewnić się, że kaniula została wprowadzona do lewego oskrzela.

Częstym błędem jest nieumieszczenie szczepionki wystarczająco głęboko w płucach, co może zablokować drogi oddechowe i utrudnić oddychanie. Gdy kaniula zostanie obrócona pod odpowiednim kątem, powinna łatwo wsunąć się w lewe oskrzela i płynnie przesuwać się na odpowiednią głębokość.

Przesuń metalową kaniulę do połowy długości do 3/4 w dół lewego płuca, używając wcześniej umieszczonego znacznika prowadzącego, aby potwierdzić, że osiągnięto odpowiednią głębokość. Po założeniu metalowej kaniuli przesuń rurkę polietylenową o kilka milimetrów, korzystając z wcześniej umieszczonego znaku prowadzącego na rurce, aby upewnić się, że jest ona wysunięta tylko na tyle daleko, aby wyjść z końca metalowej kaniuli i nie przebić płuca.

Po założeniu obu kaniul użyj dołączonej strzykawki, aby wkroplić 100 mikrolitrów zawiesiny agarowej głęboko do dużego płata lewego płuca. Wyjmij kilka milimetrów rurki i delikatnie wyjmij nienaruszone urządzenie do intubacji. Umieść go z powrotem w szklanej tubie do przechowywania i przenieś zwierzę do nowej klatki, aby wyzdrowiało.