JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:01 min. • July 8th, 2025
Zacznij od znieczulonego szczura wykazującego objawy autoimmunologicznej choroby suchego oka.
Nałóż odpowiednią ilość barwnika fluoresceinowego na rogówkę szczura.
Zamknij i otwórz powiekę szczura, aby upewnić się, że fluoresceina równomiernie rozprowadza się po rogówce.
Pozwól, aby barwnik osiadł i przylegał do rogówki.
W autoimmunologicznej chorobie suchego oka komórki odpornościowe błędnie atakują gruczoły łzowe, zmniejszając produkcję łez.
Prowadzi to do wysuszenia nabłonka rogówki i uszkodzenia leżącej poniżej błony Bowmana - bezkomórkowej strefy przed zrębem.
Cząsteczki fluoresceiny przenikają przez uszkodzone bariery rogówkowe, aby dotrzeć do leżącej poniżej warstwy zrębu bogatej w kolagen
.Tutaj cząsteczki fluoresceiny wiążą się z kolagenem, co powoduje zabarwienie włókien kolagenowych.
Korzystając z odpowiedniej techniki obrazowania, uzyskaj obrazy barwionej rogówki.
Przeanalizuj liczbę, obszar i intensywność zielonych plamek fluorescencyjnych, aby zmierzyć zakres uszkodzenia rogówki.
Użyj skanowania fluoresceinowego, aby zmierzyć uszkodzenie rogówki, dodając 2 mikrolitry 0,2% fluoresceiny do rogówki szczura. Palcem w rękawiczce biernie otwórz i zamknij powieki szczura trzy razy, aby rozprowadzić barwnik fluoresceinowy na powierzchni oka.
Po 1 minucie użyj 3-mililitrowej strzykawki, aby pobrać 1 mililitr soli fizjologicznej. Następnie umieść strzykawkę około 2 do 3 milimetrów przed rogówką i delikatnie nałóż sól fizjologiczną na oko. Przy wyłączonych światłach tła uzyskuj obrazy pod kobaltowo-niebieskim filtrem mikroskopu do obrazowania okulistycznego.