Pomiar migracji komórek NK w odpowiedzi na bodźce chemotaktyczne

Zacznij od dodania chemoatraktantów, takich jak chemokina, do płytki wielodołkowej.

Umieść w studzience przepuszczalną komorę transwell o odpowiedniej wielkości porów. Dodaj zawiesinę komórek NK lub natural killer do górnej komory i inkubuj.

Kilka cząsteczek chemokiny dyfunduje przez błonę i wiąże się z receptorami komórek NK. Uruchamia to szlaki sygnałowe, które promują zmiany cytoszkieletu, powodując kierunkowy ruch komórek w kierunku wyższego stężenia chemoatraktantu w dolnej komorze.

Po inkubacji przenieś ustaloną objętość migrowanych komórek z dolnej komory do aktywowanego fluorescencją sortowania komórek lub probówki FACS. Dodaj z góry określoną liczbę fluorescencyjnych kulek zliczających i wykonaj liczenie komórek w oparciu o FACS.

Korzystając z poniższego wzoru, określ bezwzględną liczbę migrowanych komórek NK w próbce.

Wykres punktowy podaje liczbę zliczających koralików i komórek oddzielonych jako odrębne obszary, na podstawie ich właściwości fluorescencji i rozpraszania.

Aby zmierzyć migrację komórek NK w odpowiedzi na bodźce chemotaktyczne, należy zebrać ludzkie komórki NK z 70% do 80% zlewającej się hodowli i ponownie zawiesić komórki w stężeniu 2,5 x 10⁶ komórek na mi