JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:12 min. • July 8th, 2025
Weźmy znieczuloną mysz wstępnie zaszczepioną zabitą termicznie Mycobacterium tuberculosis lub Mtb, która indukuje odpowiedź immunologiczną i generuje limfocyty T specyficzne dla Mtb.
Podawaj krople do oczu w celu rozszerzenia źrenicy, aby zwiększyć penetrację światła i poprawić obrazowanie oka. Zastosuj żel, aby zapobiec odwodnieniu rogówki.
Owiń mysz gazą, aby utrzymać ciepło ciała i umieść ją w optycznej koherentnej tomografii lub systemie OCT.
Zobrazuj oczy, aby uzyskać obrazy przekroju poprzecznego komory przedniej, w tym rogówki i soczewki, oraz komory tylnej, w tym siatkówki.
Sprawdź, aby upewnić się, że nie ma stanu zapalnego.
Wstrzyknąć zabity termicznie Mtb do jamy ciała szklistego. Immunogen rozprzestrzenia się po oku i wyzwala odpowiedź immunologiczną, indukując infiltrację wstępnie uformowanych limfocytów T specyficznych dla Mtb i innych komórek odpornościowych, powodując stan zapalny zwany zapaleniem błony naczyniowej oka.
OCT komory przedniej ujawnia naciekające komórki odpornościowe i obrzęk rogówki, podczas gdy OCT komory tylnej wskazuje na zapalenie ciała szklistego.
Oceniaj obrazy OCT na podstawie nasilenia stanu zapalnego, aby określić ilościowo postęp zapalenia błony naczyniowej oka.
Po znieczuleniu myszy rozszerz źrenicę jedną kroplą 2,5% fenylefryny, unikając przedostawania się nadmiaru kropelek do nosa lub ust. Po dwóch, trzech minutach zetrzyj nadmiar płynu i przykryj oko 0,3% żelem hypromelozowym. Następnie owiń mysz warstwą gazy chirurgicznej, aby utrzymać ciepło ciała, a następnie umieść mysz na kasecie ze zwierzętami i ustaw głowę za pomocą paska gryzącego.
Aby uzyskać optyczne obrazy koherentnej tomografii lub OCT, włącz system obrazowania OCT i otwórz oprogramowanie do obrazowania. W przypadku obrazowania w komorze tylnej należy zbliżyć OCT do powierzchni oka, uważając, aby powierzchnia soczewki nie stykała się z okiem.
Po prawidłowym ustawieniu oka zatrzymaj szybkie skanowanie, wybierz protokół skanowania woluminu i aktywuj skanowanie za pomocą opcji Celowanie. W przypadku obrazów tylnego segmentu wyreguluj, aż nerw wzrokowy zostanie wyśrodkowany w poziomym obrazie wyrównania B-Scan, a siatkówka zostanie wyrównana z pionową osią wyrównania. W przypadku obrazów segmentu przedniego dostosuj pozycję, aby wyśrodkować wierzchołek rogówki zarówno na obrazie wyrównania B-Scan, jak i na obrazie wyrównania B-Scan w pionie. Na koniec kliknij Migawka, aby przechwycić obraz skanowania woluminu. Następnie kliknij Zapisz.