Ocena aktywacji wielu kaspaz w makrofagach
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:01 min. • July 8th, 2025
Zacznij od płytki wielodołkowej zawierającej przylegające makrofagi pochodzące ze szpiku kostnego.
Wprowadź wirusy grypy A, które łączą się z makrofagami, uwalniając rybonukleoproteiny zawierające wirusowe RNA.
Białko wiążące Z-DNA 1 lub ZBP1 makrofagów oddziałuje z rybonukleoproteinami wirusa, wywołując oligomeryzację ZBP1, z kinazami i kaspazą 8.
Oligomeryzowany ZBP1 dodatkowo rekrutuje białka czujnika inflamasomów, białka adaptorowe i prokaspazę-1, tworząc kompleks multimeryczny - PANoptosome.
W obrębie PANoptosomu kaspaza inicjacyjna-8 aktywuje się poprzez rozszczepienie zbliżeniowe, dalej aktywując kaspazy efektorowe, w tym kaspazę-3 i 7.
Dodatkowo, białka czujnika inflamasomu w PANoptosomie aktywują kaskadę sygnalizacyjną, przekształcając pro-kaspazę-1 w jej aktywną formę, kaspazę-1.
Jednocześnie infekcja wirusowa indukuje uwalnianie cytochromu-c z mitochondriów, wywołując aktywację apoptosomu i przekształcając pro-kaspazę-9 do jej aktywnej formy.
Infekcja wirusowa wyzwala również niekanoniczny szlak inflamasomu, aktywując kaspazę-11.
Wprowadzić bufor do lizy makrofagów; zebrać lizat i podgrzać go, aby dezaktywować proteazy, zapobiegając degradacji kaspaz.
Odwirować i zebrać
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych