JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:58 min. • July 8th, 2025
Zdobądź krążki z liściami Arabidopsis thaliana. Zanurz je w studzienkach z mikropłytkami zawierającymi podwójnie destylowaną wodę, aby zapobiec wysuszeniu.
Inkubuj krążki, aby umożliwić powrót do zdrowia po zranieniu.
Po inkubacji usuń wodę. Dodać mieszaninę reakcyjną zawierającą peptydy pochodzące z bakterii, enzym peroksydazę chrzanową i luminol.
Za pomocą czytnika mikropłytek zmierz luminescencję w czasie.
Receptory rozpoznawania wzorców (PRR) na komórkach roślinnych wiążą peptydy bakteryjne, które są wzorcami molekularnymi związanymi z drobnoustrojami.
Ponadto PRR wiąże się ze swoim koreceptorem, ulegając wzajemnej fosforylacji, aktywując receptorowe kinazy białkowe i powodując wewnątrzkomórkowy napływ wapnia.
To z kolei aktywuje transbłonowy homolog oksydazy wybuchowej układu oddechowego lub białka RBOH.
Aktywowany RBOH katalizuje produkcję zewnątrzkomórkowych reaktywnych form tlenu lub ROS, powodując wybuch oksydacyjny. Ponadto ROS przekształca się w nadtlenek wodoru.
Peroksydaza chrzanowa wykorzystuje nadtlenek wodoru do utleniania luminolu do stanu wzbudzonego, emitując luminescencję po powrocie do stanu podstawowego.
Zmierz luminescencję, aby monitorować szybki wybuch oksy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych