Test oparty na przepływie laminarnym do badania interakcji między leukocytami a komórkami śródbłonka

0 wyświetleń3:54 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Rozpocznij od umieszczenia szklanego szkiełka z przylegającą monowarstwą śródbłonka stymulowaną cytokinami w komorze przepływowej.

Te komórki śródbłonka wyrażają cząsteczki adhezyjne powierzchniowe, takie jak selektyny, i sygnały migracyjne związane ze śródbłonkiem, takie jak chemokiny.

Wprowadzić znakowane fluorescencyjnie leukocyty do komory przepływowej.

Gdy leukocyty przepływają przez monowarstwę śródbłonka, angażują się w aktywowane komórki śródbłonka.

Selektyny na komórkach śródbłonka wiążą się z odpowiadającymi im ligandami na leukocytach.

Oddziaływania selektoryna-ligand są słabe i przejściowe, co umożliwia leukocytom toczenie się wzdłuż monowarstwy śródbłonka pod wpływem siły przepływającego pożywki.

Rolowanie pozwala leukocytom na interakcję z chemokinami, aktywując integryny i sprzyjając mocnemu zatrzymaniu leukocytów.

Następnie leukocyty rozprzestrzeniają się po monowarstwie śródbłonka, co wskazuje na ich potencjał do transmigracji, co jest kluczowym krokiem w odpowiedzi immunologicznej.

Test ten pomaga badać mechanizm adhezji, deadhezji i transmigracji leukocytów podczas perfuzji nad komórkami śródbłonka.

Użyj jednego mikromola zielonego fluorescencyjnego barwnika kwasu nukleinowego przenikającego komórkę, aby fluorescencyjnie oznaczyć leukocyty. Po znakowaniu inkubować leukocyty przez 30 minut w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Następnie odwiruj komórki z prędkością 300 razy g przez 5 minut, aby osadzać komórki.

Ponownie zawiesić w roztworze soli fizjologicznej buforowanym fosforanami, aby przepłukać komórki. Następnie odwiruj komórki w temperaturze 300 razy g przez 5 minut. W zależności od natężenia przepływu zawiesić 5 mililitrów komórek w buforze testowym. Następnie podgrzej łaźnię wodną, aby utrzymać temperaturę 37 stopni Celsjusza.

Następnie odłóż na bok 50-mililitrową strzykawkę perfuzyjną i zainstaluj ją na uchwycie strzykawki. Następnie ustaw pompę w trybie wycofania, z objętością pompy na 0 mililitrów i średnicą na 26,70 milimetra. Następnie podłącz złączkę Luer-lock do strzykawki i połącz rurkę ze złączem kolankowym luer do złącza Luer-lock. Następnie przymocuj wolny koniec rurki do komory przepływowej. Aby przylgnąć leukocyty do unieruchomionych płytek krwi, należy połączyć szkiełko ze strzykawką.

Aby perfuzji leukocytów, a następnie przylgnąć do łoża monowarstwy naczyniowej lub płytkowej, podłącz drugą rurkę do 50-mililitrowej stożkowej probówki zawierającej bufor testowy, a następnie napełnij rurkę za pomocą 1-mililitrowej pipety. Po napełnieniu rurki ściśnij ją i podłącz do komory przepływowej. Przed perfuzją leukocytów dodaj 3 milimole chlorku wapnia i 2 milimole chlorku magnezu do zawiesiny komórki. Następnie inkubuj komórki w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 5 minut.

Aby usunąć ewentualne powietrze, które utknęło w komorze i rurkach, przed perfuzją komórek należy przeprowadzić perfuzję z buforem testowym. Następnie ściśnij probówki, aby zamknąć koniec i przełącz rurkę z buforu testowego na zawiesinę komórki, zapobiegając w ten sposób uwięzieniu w środku pęcherzyków powietrza.

Aby dotarły pierwsze komórki, należy je przetopić z odpowiednią szybkością przepływu i naprężeniem ścinającym. Kontynuuj perfuzję komórek, utrzymując natężenie przepływu i naprężenia ścinające przez dwie minuty. Następnie uchwyć sześć obrazów toczących się i odstraszających komórek w ciągu 2 do 6 minut za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego z 10-krotnym powiększeniem podłączonego do kamery cyfrowej.

09:01

Ocena interakcji leukocytów-śródbłonka w warunkach przepływu w autoperfuzyjnym teście komorowym ex vivo z mikroprzepływem

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:05

Fluorescencyjne znakowanie barwnikami erytrocytów i leukocytów w celu badania dynamiki przepływu w krążeniu siatkówkowym myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:47

Test mikroprzepływowy do oceny adhezji leukocytów do indukowanych przez człowieka pluripotencjalnych komórek śródbłonka pochodzących z komórek macierzystych (hiPSC-EC)

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

14:16

Analiza fizjologicznych leukocytów za pośrednictwem selektyny E toczących się po śródbłonku mikronaczyniowym

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

12:43

Równoległa komora przepływowa i ciągły obwód przepływu do oceny śródbłonkowych komórek progenitorowych pod wpływem naprężeń ścinających przepływu laminarnego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:10

Micro-Parallel Plate Flow Chamber Model for Studying Bacterial Adhesion to Human Endothelial Cells

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:56

Nowatorskie trójwymiarowe urządzenie z komorą przepływową do badania wynaczynienia komórek krążących w fizjologicznych warunkach przepływu kierowanego przez chemokinę

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:38

Test adhezji przepływowej do badania rekrutacji leukocytów do ludzkiego śródbłonka sinusoidalnego wątroby w warunkach naprężeń ścinających

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:26

Obrazowanie w czasie rzeczywistym połączeń komórka-komórka śródbłonka podczas transmigracji neutrofili pod wpływem przepływu fizjologicznego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:40

Test adhezji pod wpływem naprężenia ścinającego do badania oddziaływań cząsteczki adhezyjnej limfocytów T

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026