JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:14 min. • July 8th, 2025
Weź płytkę wielodołkową zawierającą ustalony model zakażenia Mycobacterium tuberculosis lub Mtb.
Studnie zawierają agregaty komórkowe składające się z gęsto upakowanych makrofagów nekrotycznych zakażonych Mtb i Mtb, otoczonych niezakażonymi makrofagami - naśladującymi infekcję in vivo.
Weź seryjne rozcieńczanie antybiotyków ryfampicyny i moksyfloksacyny.
Wyrzuć pożywkę z płytki infekcyjnej, przenieś rozcieńczone antybiotyki do studzienek i inkubuj.
Antybiotyki dyfundują przez agregaty komórkowe i wnikają do komórek bakteryjnych.
Ryfampicyna wiąże bakteryjną polimerazę RNA, hamując syntezę RNA i powodując śmierć bakterii.
Moksyfloksacyna wiąże topoizomerazę DNA bakterii, hamując replikację i zatrzymując wzrost bakterii. Wiązanie indukuje również reakcje stresowe, w tym akumulację reaktywnych form tlenu, zabijając bakterie.
Po inkubacji dodaj rezazurynę - wskaźnik redoks. Wewnątrz żywych i metabolicznie aktywnych bakterii enzym oksydoreduktaza redukuje niebieską rezyzynę do różowej fluorescencyjnej rezorufiny.
Zmierz fluorescencję, aby wykryć żywe bakterie.
Przeżywalność bakterii zmniejsza się wraz ze wzrostem stężenia antybiotyków, co świadczy o ich skuteczności wobec Mtb.
Do badani
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych