Test in vitro w celu zbadania zależnego od przeciwciał wzmocnienia infekcji wirusowej

Pobrać mikropłytkę z seryjnymi rozcieńczeniami próbki surowicy zawierającej przeciwciała przeciwko wirusowi Zika.

Dodaj cząsteczki wirusa reporterowego dengi lub RVP i inkubuj.

Zmodyfikowane RVP składają się z otoczki z białkami strukturalnymi i nukleokapsydu zawierającego genomowe RNA, kodujące białko fluorescencyjne.

Homologia strukturalna białek otoczki wirusów dengi i Zika powoduje, że przeciwciała reagują krzyżowo z RVP, tworząc kompleks.

Dodaj ludzkie komórki białaczkowe niedopuszczalne do zakażenia przez RVP.

Komórki posiadają receptory Fc, które rozpoznają przeciwciała związane z RVP, ułatwiając RVP wnikanie do endosomów - nazywa się to wzmocnieniem zależnym od przeciwciał lub ADE.

Osadzać komórki i odrzucać supernatant zawierający niezinternalizowane RVP. Dodać pożywkę wzrostową i inkubować.

Zależna od pH fuzja RVP i błon endosomalnych uwalnia nukleokapsyd, który rozkłada się, uwalniając genomowy RNA, umożliwiając ekspresję białek fluorescencyjnych.

Napraw komórki i przeanalizuj je za pomocą cytometrii przepływowej.

Wyższa fluorescencja przy odpowiednim stężeniu przeciwciał oznacza zwiększoną internalizację RVP, co wskazuje na zwiększoną infekcję.

Rozpocząć od rozmrożenia