Test oparty na CFSE do monitorowania migracji komórek dendrytycznych skóry do drenujących węzłów chłonnych u zakażonych myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:34 min. • July 8th, 2025
Weź znieczuloną mysz. Wstrzyknąć zawiesinę BCG Mycobacterium bovis do opuszki tylnej stopy.
Komórki dendrytyczne skóry rozpoznają i fagocytozą prątki.
Ponadto przetworzone składniki prątków są prezentowane na cząsteczkach MHC klasy II.
Wstrzyknąć przepuszczalny dla komórek barwnik CFSE do tej samej poduszki stopy.
Wewnątrzkomórkowe esterazy rozszczepiają CFSE na nieprzepuszczalny dla komórek produkt fluorescencyjny, barwiąc komórki.
Ponadto aktywowane komórki dendrytyczne migrują przez naczynia limfatyczne do węzła chłonnego podkolanowego, aktywując limfocyty T.
Węzeł chłonny podkolanowy należy chirurgicznie wyciąć i zhomogenizować przez sitko, uzyskując zawiesinę jednokomórkową.
Odwirować i ponownie zawiesić komórki w buforze.
Przenieś komórki do probówki cytometrii przepływowej. Odwirować i potraktować komórki koktajlem przeciwciał.
Przeciwciała blokujące Fc blokują receptory Fc, podczas gdy przeciwciała znakowane fluoroforem wiążą się z markerami powierzchniowymi CD11c i cząsteczkami MHC klasy II na komórkach odpornościowych.
Za pomocą cytometrii przepływowej zidentyfikuj komórki dendrytyczne skóry znakowane CFSE z wysoką ekspresją MHC-II i niską ekspresją CD11c, potwierdzając i
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych