JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 6:27 min. • July 8th, 2025
Weźmy posiew makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego. Usuń pożywkę i dodaj bakterie Salmonella wykazujące ekspresję fluorescencyjnego białka cytoplazmatycznego.
Wirować, aby ułatwić kontakt bakterii z makrofagami i inkubować.
Bakterie wiążą się z receptorami makrofagów, ułatwiając internalizację wewnątrz fagosomu.
Fagosom łączy się z pęcherzykami pochodzącymi z endosomu, a jednocześnie bakterie wydzielają efektory, przekształcając fagosom w wakuolę zawierającą Salmonellę lub SCV.
Podgrupa SCV pęka, uwalniając zinternalizowane bakterie do cytoplazmy.
Dodaj antybiotyk, aby wyeliminować niezinternalizowane bakterie. Odessać pożywkę zawierającą martwe bakterie.
Wprowadzić bufor zawierający detergent digitoninę, która wiąże się z cholesterolem.
Wiązanie digitoniny z błoną plazmatyczną bogatą w cholesterol powoduje tworzenie się porów, podczas gdy błona SCV z niedoborem cholesterolu pozostaje nienaruszona - zjawisko to określa się mianem przepuszczalności różnicowej.
Dodaj znakowane fluorescencyjnie przeciwciała, które wnikają do przepuszczalnych komórek, aby związać bakterie cytozolowe.
Użyj detergentu do lizy komórek i SCV, uwalniając wszystkie zinternalizowane bakterie.
Za pomocą c
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych