Test przyłączania wirusa do badań przesiewowych związków przeciwwirusowych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:47 min. • July 8th, 2025
Zacznij od płytki wielodołkowej zawierającej wstępnie schłodzoną monowarstwę ludzkich komórek wątrobiakowych.
Leczyć studzienki testowe mieszanką genetycznie zmodyfikowanego wirusa zapalenia wątroby typu C przenoszącego gen lucyferazy i związku docelowego; leczyć studzienki kontrolne samym wirusem.
W studzienkach testowych cząsteczki docelowe oddziałują z glikoproteinami wirusowymi i receptorami na powierzchni komórki, zapobiegając przyłączaniu się wirusa.
Jednak w studzienkach kontrolnych glikoproteiny wirusowe oddziałują z receptorami na powierzchni komórki, umożliwiając ich przyłączenie. Niska temperatura hamuje wnikanie wirusa.
Usunąć supernatant, wprowadzić pożywkę i ponownie inkubować w optymalnej temperaturze, ułatwiając wnikanie wirusa.
Po wniknięciu wirus uwalnia materiał genetyczny, inicjując syntezę białek wirusowych i enzymów lucyferazy, które są wydzielane do pożywki.
Przenieść supernatant zawierający lucyferazy i wprowadzić substrat.
Interakcja enzym-substrat wytwarza światło proporcjonalnie do poziomu lucyferazy.
Mniejsze natężenie światła w studzienkach testowych, w porównaniu z studzienkami kontrolnymi, wskazuje na właściwości przeciwwirusowe związku docelowego.
W
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych