Test do oceny immunodominacji w odpowiedziach cytotoksycznych limfocytów T
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:00 min. • July 8th, 2025
Zacznij od komórek docelowych znakowanych barwnikiem fluorescencyjnym, prezentujących niereaktywny epitop peptydowy lub epitopy peptydowe pochodzące z antygenu nowotworowego o różnej immunogenności.
Komórki te wykazują różną intensywność fluorescencji - niską, pośrednią i wysoką - odpowiadającą prezentacji odpowiednio niereaktywnych, subdominujących i immunodominujących epitopów peptydowych.
Zawiesinę komórkową należy podać dożylnie uczulonej myszy.
Wstrzyknięte komórki przemieszczają się do śledziony zawierającej populacje komórek odpornościowych, w tym cytotoksyczne limfocyty T lub CTL.
W śledzionie CTL oddziałują z epitopami komórek docelowych.
Epitopy immunodominujące, będąc bardziej immunogennymi, wywołują silną odpowiedź immunologiczną CTL, uwalniając substancje cytotoksyczne i powodując lizę komórek fluorescencyjnych o wysokiej intensywności.
Zbierz śledzionę myszy i mechanicznie ją rozłóż. Dodaj bufor do lizy, aby wyeliminować czerwone krwinki i przefiltrować zawiesinę.
Odwirować i ponownie zawiesić osad komórkowy.
Posortuj komórki za pomocą sortera komórek aktywowanego fluorescencją. Zmniejszenie liczby komórek fluorescencyjnych o wysokiej intensywności, w porównaniu z kom
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych