JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:50 min. • July 8th, 2025
Weź wielodołkową płytkę zawierającą chorobotwórcze bakterie jelitowe w pożywce wzrostowej.
Pożywka w wybranych studzienkach zawiera sole żółciowe – lub cząsteczki amfipatyczne o działaniu podobnym do detergentu – naśladujące trudne warunki wzrostu.
Sole żółciowe rozrywają błonę bakteryjną i powodują uszkodzenia DNA i białek.
Jako mechanizm przeciwdziałający bakteriom tworzą biofilm – ustrukturyzowaną społeczność bakteryjną zamkniętą w samodzielnie wyprodukowanej matrycy zewnątrzkomórkowych substancji polimerowych lub EPS, zawierającej polisacharydy, białka, lipidy i kwasy nukleinowe pochodzenia mikrobiologicznego.
Warstwa EPS chroni bakterie przed narażeniem na sole żółciowe.
Po inkubacji odessać pożywkę, aby usunąć swobodnie unoszące się bakterie.
Potraktuj buforem utrwalającym, aby zachować architekturę biofilmu, i umyj, aby usunąć nadmiar buforu.
Dodaj znakowaną fluorescencyjnie konkanawalinę A - lektynę, która wiąże się z polisacharydami EPS, oznaczając biofilm. Umyć, aby usunąć nadmiar Concanavalin A.
Za pomocą czytnika płytek zmierz fluorescencję. Wyższa intensywność fluorescencji w studzienkach zawierających sól żółciową wskazuje na tworzenie się biofilmu wywołanego solą żół
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych