JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:10 min. • July 8th, 2025
Przygotować mieszankę transfekcyjną, dodając odpowiedni polimer kationowy i oddzielne wektory plazmidowe dla genów przeciwciał o łańcuchach ciężkich i lekkich.
Dodatnio naładowany polimer wiąże się z ujemnie naładowanymi plazmidami, tworząc kompleksy.
Dodać tę mieszaninę transfekcji do wielodołkowej płytki zawierającej hodowlę ludzkich embrionalnych komórek nerki w podłożu bez surowicy i inkubować.
Kompleksy dostają się do komórek przez endocytozę, powodując obrzęk i pęknięcie endosomalne, uwalniając je do cytoplazmy.
Polimer kationowy wytwarza pory w błonie jądrowej, ułatwiając wnikanie wektorów i umożliwiając ich transkrypcję, a następnie translację na białka o łańcuchach ciężkich i lekkich.
Białka te przemieszczają się do retikulum endoplazmatycznego, gdzie białka o łańcuchach ciężkich i lekkich są dimeryzowane i kowalencyjnie połączone wiązaniami dwusiarczkowymi, tworząc przeciwciała.
Przeciwciała przemieszczają się do aparatu Golgiego w celu dodatkowych modyfikacji potranslacyjnych i są pakowane w pęcherzyki w celu uwolnienia zewnątrzkomórkowego.
Zebrać pożywkę zawierającą uwolnione przeciwciała. Dodaj pożywkę bez surowicy, aby kontynuować wytwarzanie przeciwciał.
Przygotuj ko
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych