JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:38 min. • July 8th, 2025
Zacznij od probówki zawierającej kationowy środek transfekcyjny na bazie lipidów i dodaj rekombinowane plazmidy ekspresyjne.
Plazmid przenosi gen kodujący rekombinowane przeciwciała ukierunkowane na metalopeptydazę i białko zielonej fluorescencji lub GFP pod jednym promotorem, podczas gdy gen oporności na antybiotyki znajduje się pod innym promotorem.
Dodatnio naładowane lipidy oddziałują z ujemnie naładowanym plazmidem, tworząc kompleks.
Przenieś kompleksy na wielodołkową płytkę zawierającą komórki ssaków, umożliwiając plazmidowi wejście do cytoplazmy.
Plazmid dociera do jądra i ulega transkrypcji na mRNA dla białek oporności na antybiotyki i bicystronicznego mRNA kodującego rekombinowane przeciwciała i GFP.
Te mRNA prowadzą do produkcji rekombinowanych przeciwciał, GFP i białek oporności na antybiotyki.
Po transfekcji zastąp pożywkę podłożem wzbogaconym w surowicę.
Wprowadź antybiotyk, selektywnie eliminując komórki nietransfekowane, podczas gdy transfekowane komórki oporne na antybiotyki przeżywają.
Stosując technikę sortowania komórek aktywowaną fluorescencją, zbierz zielone komórki fluorescencyjne wykazujące ekspresję rekombinowanych przeciwciał.
Rozcieńczone transfekowane kom
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych