Konwekcyjne dostarczanie przeciwciał do mózgu myszy

Przymocuj znieczuloną mysz, która ma nacięcie w linii środkowej czaszki, do ramy stereotaktycznej.

Wykryj bregmę, punkt odniesienia na czaszce, i określ miejsce wstrzyknięcia.

Stwórz otwór w tym miejscu, unikając uszkodzenia opony twardej pokrywającej mózg.

Weź cewnik schodkowy załadowany przeciwciałami, zamontowany na robocie stereotaktycznym i podłączony do pompy infuzyjnej.

Cewnik składa się ze stopionej kapilary krzemionkowej wystającej z metalowej igły, tworzącej schodkową średnicę zewnętrzną w miejscu zgrzewania.

Wprowadzić cewnik do miąższu mózgu. Uruchomić pompę infuzyjną, aby wytworzyć gradient ciśnienia przy otworze cewnika i dostarczyć przeciwciała w kontrolowanej szybkości, technika znana jako dostarczanie ze wzmocnieniem konwekcyjnym.

Stopniowana średnica ściska tkankę, tworząc uszczelnienie.

Uszczelka zapobiega refluksowi płynu i umożliwia dystrybucję dużych objętości przeciwciał, jednocześnie zmniejszając ryzyko uszkodzenia tkanek.

W celu wstrzyknięcia przeciwciała do prążkowia myszy potwierdź brak reakcji na uszczypnięcie skóry u znieczulonej myszy i ogol głowę trymerem do włosów. Zdezynfekuj skórę wacikami nasączonymi roztworem jodu.

Użyj skalpela, aby wykonać 10-milimetrowe nacięcie skóry wzdłuż linii środkowej czaszki, kończąc na poziomie oczu. Zamocuj mysz w ramie stereotaktycznej za pomocą zacisku na nos i listew dousznych, uważając, aby powierzchnia czaszki była pozioma i szczelnie zabezpieczona.

Umieść strzykawkę w robocie stereotaktycznym i zsynchronizuj wiertło z końcówką cewnika w punkcie odniesienia. Użyj kleszczy, aby cofnąć skórę i zlokalizować bregmę na powierzchni czaszki. Odwołaj się do bregma w oprogramowaniu za pomocą końcówki wiertła i przesuń wiertło na 1 milimetr z przodu i 2 milimetry z boku od pozycji bregma.

Wywierć otwór na zadziory, uważając, aby nie uszkodzić opony twardej, i przesuń strzykawkę nad otworem na zadziory. Dozować od 0,5 do 1 mikrolitra ze strzykawki, aby upewnić się, że w cewniku nie pozostały pęcherzyki powietrza. Rozpocznij podawanie ze wzmocnieniem konwekcyjnym, jak pokazano, obserwując powierzchnię czaszki pod kątem śladów cofania się płynu z miejsca wstrzyknięcia.

Po zakończeniu podawania i wyjmowania cewnika należy uruchomić pompę iniekcyjną z prędkością 0,2 mikrolitra na minutę, aby sprawdzić, czy cewnik nie jest zatkany podczas wstrzykiwania. Jeśli nie doszło do zatkania, należy natychmiast zaobserwować kroplę mieszanki do wstrzykiwań wypływającą z końcówki cewnika.