JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:48 min. • July 8th, 2025
Zacznij od funkcjonalizowanych aminami krążków z bibuły filtracyjnej i zanurz je w aldehydzie glutarowym, odczynniku sieciującym.
Aldehyd glutarowy reaguje z grupami aminowymi w reakcji aminowo-aldehydowej.
Umieść krążki w tubie. Dodaj wodę, wstrząśnij i odesshaj, aby usunąć resztki aldehydu glutarowego.
Po wysuszeniu wprowadzić przeciwciała wychwytujące specyficzne dla fragmentu immunoglobuliny-G-Fc. Grupy aminowe na tych przeciwciałach oddziałują z grupami aldehydowymi na krążkach papierowych, ułatwiając ich kowalencyjną immobilizację.
Przemyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał i wprowadzić bufor blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu.
Następnie dodaj próbkę testową zawierającą cząsteczki immunoglobuliny G na papierowy krążek. Cząsteczki immunoglobuliny G oddziałują z przeciwciałami wychwytującymi.
Nakładka z przeciwciałami wykrywającymi swoiste dla fragmentów IgG-Fc sprzężone z peroksydazą chrzanową, które oddziałują z wstępnie związaną immunoglobuliną G.
Przemyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał i dodać mieszaninę substratu chromogennego i nadtlenku wodoru.
W obecności nadtlenku wodoru peroksydaza chrzanowa katalizuje utlenianie substratu chromogenic
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych