Technika in vivo do śledzenia transportu limfocytów T indukowanych przez bispecyficzne przeciwciała do nowotworów

Weźmy znieczuloną mysz z obniżoną odpornością z podskórnym ksenoprzeszczepem guza, który wykazuje nadekspresję antygenu związanego z nowotworem lub TAA.

Retroorbitalnie wstrzyknąć efektorowe limfocyty T wyrażające enzym lucyferazy.

Podskórnie podawać interleukinę 2, cytokinę wspomagającą przeżycie efektorowych limfocytów T.

Wstrzyknąć zaoczodołowo bispecyficzne przeciwciała zaprojektowane tak, aby zawierały miejsca wiązania dla komórek T i nowotworowych. Pozwól myszy na odzyskanie sprawności.

Przeciwciała i limfocyty T docierają do guza poprzez krążenie.

Przeciwciała wiążą się z CD3 na limfocytach T i TAA na komórkach nowotworowych, indukując efektorowe limfocyty T do uwalniania toksyn, które inicjują apoptozę w komórkach nowotworowych i uwalniają chemokiny, które rekrutują więcej limfocytów T do guza.

Znieczulij mysz, po oczoczocie wstrzyknij substrat lucyferazy i przystąp do obrazowania in vivo.

Lucyferazy wewnątrz limfocytów T utlenia substrat, emitując bioluminescencję.

Obserwuj bioluminescencję w czasie. Wielkość sygnału koreluje z zakresem naciekania limfocytów T w obrębie guza.

Po znieczuleniu myszy za pomocą igły o rozmiarze 26, wstrzyknij 20 milionów limfocytów T w 100 mik