JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:31 min. • July 8th, 2025
Zacznij od wkładu mikroprzepływowego wyposażonego w zbiorniki magazynowe i jednokierunkowe pompy, które dostarczają odczynniki kanałami do strefy reakcji.
Strefa reakcji zawiera wiele plamek unieruchomionych różnymi alergenami.
Załaduj bufor do mycia, bufor blokujący, przeciwciała drugorzędowe sprzężone z peroksydazą i substrat peroksydazy chemiluminescencyjnej do wyznaczonych zbiorników.
Dodać próbkę surowicy zawierającą swoistą dla alergenu immunoglobulinę E lub IgE.
Rozpocznij analizę wewnątrz analizatora chemiluminescencji.
W obrębie strefy reakcji bufor blokujący przepływa i blokuje niespecyficzne miejsca interakcji.
Wprowadzenie surowicy pozwala IgE na interakcję z unieruchomionymi alergenami.
Mycie eliminuje niezwiązane IgE.
Następnie napływają przeciwciała drugorzędowe sprzężone z peroksydazą i oddziałują z unieruchomionymi IgE.
Kolejne mycie usuwa niezwiązane przeciwciała.
Następnie analizator wprowadza substrat chemiluminescencyjny i nadtlenek wodoru.
Peroksydaza utlenia podłoże, emitując luminescencję.
Intensywność luminescencji w każdym miejscu zapewnia wymierne wskazanie odrębnych IgE specyficznych dla alergenu w surowicy.
Aby przetestować próbki surowicy na obecność przeciwciał immunoglobuliny E w surowicy przeciwko całym alergenom, losowo wybierz trzy próbki z co najmniej 900 mikrolitrami surowicy, weź chip z zestawu i ponumeruj go. Następnie włącz komputer i zasilanie analizatora. Uruchom program LabIT na komputerze.
Jeśli pojawi się okno ostrzegawcze z ciemną ramką, kliknij przycisk OK, aby uruchomić test szczelności. Następnie kliknij środkowe logo, aby przejść do interfejsu operacyjnego. Sprawdź temperaturę reakcji i temperaturę urządzenia sprzężonego z ładunkiem lub CCD. Temperatura reakcji powinna wzrosnąć do 37 plus minus 1 stopni Celsjusza w ciągu około 10 minut, a temperatura CCD powinna spaść do minus 15 plus minus 1 stopni Celsjusza.
Gdy temperatura CCD spadnie do minus 15 plus minus 1 stopni Celsjusza, upewnij się, że w przyrządzie nie pozostały żadne inne przedmioty i zamknij drzwi. Następnie kliknij Narzędzia, Test systemu, Test szczelności. Po zakończeniu testu pojawi się okno raportu.
Następnie załaduj 620 mikrolitrów buforu do przemywania wody, 120 mikrolitrów buforu blokującego, 60 mikrolitrów koniugatów A i B, 60 mikrolitrów substratów A i B oraz 100 mikrolitrów każdej próbki surowicy do odpowiednich zbiorników odczynników na kartridżu mikroprzepływowym. Po kliknięciu identyfikatora kasety użyj skanera kodów kreskowych, aby zeskanować numer seryjny kasety i wprowadzić identyfikator próbki. Następnie umieść wkład w analizatorze, zamknij drzwiczki i kliknij analyzer, a następnie uruchom, aby rozpocząć analizę.