Test in vitro do pomiaru fagocytozy komórkowej zależnej od przeciwciał za pomocą fagocytów
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:03 min. • July 8th, 2025
Weźmy znakowane fluorescencyjnie mikrosfery sprzężone z antygenem będącym przedmiotem zainteresowania. Unieruchomione antygeny są związane z przeciwciałami specyficznymi dla antygenu.
Dodaj leukocyty, w tym limfocyty niefagocytarne, granulocyty fagocytarne i monocyty. Inkubować mieszaninę w warunkach fizjologicznych.
Region Fc unieruchomionego przeciwciała wiąże się z receptorem Fc na fagocycie, wywołując fagocytozę komórkową zależną od przeciwciał lub ADCP.
Odwirować w celu osadzenia komórek i odrzucenia supernatantu zawierającego niezinternalizowane mikrosfery.
Dodaj barwnik żywotności, który wnika w martwe komórki, znakując je fluorescencyjnie.
Odwirować w celu osadzenia komórek i usunięcia supernatantu.
Dodaj znakowane fluorescencyjnie przeciwciała, które wiążą się z leukocytami.
Odwirować, aby odrzucić supernatant i utrwalić komórki.
Za pomocą cytometrii przepływowej najpierw wyeliminuj martwe komórki, które są dodatnie pod względem barwienia żywotności.
Następnie wybierz żywotne leukocyty i rozróżnij granulocyty, monocyty i limfocyty na podstawie ich ziarnistości i właściwości rozpraszania.
Zmierz intensywność fluorescencji mikrosferycznie dodatnich komórek fagocytarnych, aby
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych