Test in vivo do wykrywania mitofagii u nicieni transgenicznych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:39 min. • July 8th, 2025
Weźmy transgeniczne nicienie, w których komórki mięśniowe ściany ciała wyrażają DCT-1 znakowane na zielono fluoroforem, białko błony mitochondrialnej, i LGG-1 znakowane czerwonym fluoroforem, białko błony fagoforowej.
Umieść robaki na pożywce wzrostowej zawierającej lek wywołujący mitofagię.
Lek uszkadza mitochondria komórkowe, inicjując mitofagię lub selektywny klirens uszkodzonych mitochondriów.
DCT-1 na uszkodzonych mitochondriach ulega ubikwitynacji i fosforylacji, ułatwiając interakcję z LGG-1 na błonie fagoforu.
Fagofor rozszerza się wokół mitochondriów, tworząc autofagosom ukierunkowany na degradację lizosomalną.
Umieść nicienie w znieczuleniu na szkiełku mikroskopowym, aby je unieruchomić, i umieść szkiełko nakrywkowe.
Pod mikroskopem fluorescencyjnym uwidocznij żółte plamy w komórkach mięśniowych, wskazujące na kolokalizację DCT-1 emitującego zieloną fluorescencję i LGG-1 wykazującego czerwoną fluorescencję. Potwierdza to występowanie mitofagii.
Pierwszego dnia wybierz larwy L4 zwierząt transgenicznych wykazujących ekspresję zarówno DCT-1::GFP, jak i DsRed::LGG-1 w komórkach mięśniowych ściany ciała i umieść je na pożywce wzrostowej nicieni z nasionami OP50. Umieść od 5 do
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych