Technika ex vivo do wytwarzania chimerycznych limfocytów T receptora antygenowego
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:38 min. • July 8th, 2025
Weź pierwotne limfocyty T, zmieszane z kulkami magnetycznymi sprzężonymi z przeciwciałami w pożywce uzupełnionej interleukiną-2 i inkubuj.
Przeciwciała wiążą się z CD3 w kompleksie receptorów limfocytów T i receptorem kostymulującym CD28, podczas gdy interleukina-2 wiąże się z pokrewnym receptorem, powodując aktywację i proliferację limfocytów T.
Wprowadzić wektory lentiwirusowe z transgenicznym RNA kodującym chimeryczny receptor antygenowy lub CAR i inkubować.
Po fuzji błony komórkowej wektora wirusowe RNA ulega odwrotnej transkrypcji do DNA, integrując się z genomem gospodarza.
Transdukowane limfocyty T wyrażają CAR związane z powierzchnią.
Zbieraj komórki w określonych odstępach czasu.
W celu kriokonserwacji należy pobrać porcję komórek, odłączyć związane kulki przez pipetowanie i magnetycznie je oddzielić.
Odwiruj komórki i ponownie zawieś je w podłożu do krioprezerwacji.
Zamroź komórki i przechowuj je w temperaturze kriogenicznej.
Aby ocenić ekspresję CAR, weź kolejną porcję komórek, odwiruj komórki i ponownie zawieś je w buforze.
Wprowadzić przeciwciało znakowane fluorescencyjnie specyficzne dla CAR i wykryć ekspresję CAR za pomocą cytometrii przepływowej.
Aktywuj świeże lub
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych