JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:41 min. • July 8th, 2025
Weźmy polipleksy transfekcyjne zawierające docelowe plazmidy związane z polimerem. Plazmidy kodują antygen wirusowy połączony ze znacznikiem peptydowym i znacznikiem powinowactwa.
Inkubuj polipleksy z komórkami ssaków, które internalizują polipleksy wewnątrz endosomów.
Polimer indukuje pękanie pęcherzyków. Uwolnione plazmidy wyrażają antygen wirusowy, który jest wydzielany zewnątrzkomórkowo.
Zebrać supernatant zawierający antygen i zanieczyszczenia. Dodaj konkurencyjny środek w niskim stężeniu.
Załaduj go do kolumny chromatografii powinowactwa.
Znaczniki powinowactwa wiążą się z żywicą kolumnową, unieruchamiając antygen, podczas gdy konkurencyjny czynnik zmniejsza niespecyficzne wiązanie.
Przelej konkurencyjny środek w niskim stężeniu, usuwając słabo związane zanieczyszczenia.
Przemyć zwiększającymi się stężeniami konkurencyjnego czynnika, aby przemieścić silnie związane antygeny, uwalniając je.
Wprowadzić bakteryjne pęcherzyki błony zewnętrznej lub OMV z białkiem wychwytującym związaną z powierzchnią i inkubować.
Znaczniki peptydów antygenowych wiążą się z białkami wychwytującymi, tworząc szczepionkę OMV z wielowalentnym wyświetlaczem antygenu
.Wykonaj oczyszczanie OMV SpyCatcher.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych