Generowanie ex vivo modelu zranionej skóry owcy zakażonej patogenem bakteryjnym

Pobrać wstępnie wysterylizowany wycinek biopsji skóry pobrany z czoła jagnięcia w podłożu niezawierającym antybiotyków.

Przekrój składa się z zewnętrznego naskórka i leżącej pod nim warstwy skóry właściwej.

Usuń pożywkę i użyj bufora do umycia sekcji.

Wykonaj okrągłe nacięcie w sekcji i usuń górną warstwę. To przełamuje barierę, generując łożysko rany w skórze.

Przenieść zranione odcinki na przepuszczalny wkład membranowy w płytce wielodołkowej zawierającej pożywkę wolną od antybiotyków.

Wprowadzić zawiesinę bakterii chorobotwórczych na łożysko rany i inkubować.

Podczas inkubacji łożysko rany zapewnia powierzchnię tkanki do przyczepiania się bakterii i składników odżywczych wspomagających wzrost bakterii.

Pozwala to na namnażanie się i rozprzestrzenianie bakterii po łożysku rany, tworząc infekcję.

Aby zainfekować próbkę skóry, przygotuj świeżą 24-dołkową płytkę z 400 mikrolitrami wstępnie podgrzanego podłoża wolnego od antybiotyków i dodaj 24-dołkowe wkładki za pomocą sterylnych kleszczyków. Usuń podłoże z próbek skóry, umyj je 500 mikrolitrami sterylnego PBS i usuń płyn do mycia.

Użyj sterylnych kleszczy, aby delikatnie przytrzymać próbkę na dnie studzienki. Użyj 4-milimetrowej bi