Test in vitro w celu oceny aktywności przeciwnowotworowej komórek CAR T specyficznych dla nowotworu
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:42 min. • July 8th, 2025
Weź płytkę wielodołkową zawierającą chłoniaka z komórek B, komórki nowotworowe wyrażające antygen powierzchniowy specyficzny dla komórek B i cytoplazmatyczny enzym lucyferazy.
Wprowadzić limfocyty CAR T do wybranych studzienek i inkubować. Komórki wyrażają chimeryczne receptory antygenowe lub CAR, składające się z domeny zewnątrzkomórkowej ukierunkowanej na antygen nowotworowy i wewnątrzkomórkowe domeny sygnałowe.
CAR wiąże się z antygenem nowotworowym, indukując aktywację limfocytów T CAR.
Aktywowane komórki uwalniają cytokiny, które promują aktywność przeciwnowotworową komórek, wywołując uwalnianie toksyn.
Toksyny dostają się do komórek nowotworowych i indukują śmierć komórki.
Zawiruj komórki i wyizoluj supernatant. Określ ilościowo cytokiny, aby ocenić aktywność limfocytów CAR T.
Ponownie zawiesić komórki w buforze zawierającym lucyferynę, substrat bioluminescencyjny.
Po wejściu lucyferyna jest utleniana przez lucyferazy w żywych komórkach nowotworowych, emitując światło.
Zmierz bioluminescencję, aby zidentyfikować zmniejszony sygnał w leczonych komórkach nowotworowych, potwierdzając cytotoksyczność za pośrednictwem limfocytów CAR T.
Najpierw zasiaj 10 000 syngenicznych docelowy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych