Opracowanie humanizowanego modelu myszy z ludzkimi komórkami wątroby i komórkami odpornościowymi

Zacznij od znieczulonej myszy z niedoborem odporności, która nie ma różnych komórek odpornościowych.

Ta transgeniczna mysz jest wstępnie leczona środkiem przeciwwirusowym i chemioterapeutykiem. Środek przeciwwirusowy oddziałuje wyłącznie z białkami wirusowymi obecnymi w transgenicznych komórkach wątroby, sprzyjając ich eliminacji.

Tymczasem chemioterapeutyk eliminuje aktywnie dzielące się komórki macierzyste w szpiku kostnym, tworząc niszę do wytwarzania komórek odpornościowych.

Przeanalizuj mysz i odsłoń śledzionę.

Weź zawiesinę komórkową ludzkich komórek wątroby i hematopoetycznych komórek progenitorowych macierzystych lub HSPC i wstrzyknij je do dolnego bieguna śledziony.

Podwiązać śledzionę powyżej miejsca wstrzyknięcia, aby ograniczyć komórki do dolnego bieguna i ułatwić ich wejście do krążenia myszy.

Zamknij nacięcie.

Wstrzyknięte komórki wątroby docierają do tkanki wątroby i tworzą ludzkie komórki wątroby w modelu mysim.

W szpiku kostnym migrowane HSPC różnicują się w różne ludzkie komórki odpornościowe.

W ten sposób powstaje podwójnie humanizowany model myszy z ludzkimi komórkami wątroby i komórkami odpornościowymi.

Najpierw przymocuj jeden koniec sterylnej rurki przedłużającej do igły o rozmiarze 30, a drugi koniec do strzykawki o pojemności 1 mililitra. Napełnić strzykawkę zawiesiną połączonych HEP i HSPC. Umieścić strzykawkę w wycięciu powtarzalnej pipety dozującej i wyregulować dozownik tak, aby dozował 10 mikrolitrów w każdym naciśnięciu. Ogol każdą mysz zgodnie z protokołem tekstowym i wyszoruj lewą stronę ciała każdej myszy 10% jodowidonu, a następnie 70% alkoholu izopropylowego.

Za pomocą nożyczek typu Vannas wykonaj małe nacięcie w skórze, mięśniach i otrzewnej po lewej stronie ściany otrzewnej, aby wejść do jamy otrzewnej około 5 milimetrów poniżej dolnej krawędzi klatki piersiowej. Zlokalizuj śledzionę i użyj kleszczyków, aby lekko przyciągnąć ją do obszaru operacyjnego, aby uzyskać łatwy dostęp, a następnie włóż igłę o rozmiarze 30 w dolny biegun śledziony.

Następnie odblokuj tłok pipety dozującej i dozuj jednorazowo 10 mikrolitrów objętości, z ograniczeniem od 60 do 80 mikrolitrów na śledzionę. Powoli cofnij igłę i przytnij śledzionę klipsami do podwiązywania za pomocą aplikatora do podwiązywania. Następnie użyj aplikatorów z bawełnianą końcówką, zwilżonych sterylnym PBS, aby wepchnąć śledzionę z powrotem do jamy ciała. Użyj przerwanego wzoru szwów, aby zamknąć warstwę mięśniową ściany brzucha. Osiągnij zamknięcie skóry za pomocą przerwanego wzoru szwów za pomocą szwów niewchłanialnych.