Izolacja mikrogleju z kory mózgowej dorosłej myszy

Weźmy świeżo pobraną korę mózgową myszy.

Pokrój tkankę na małe fragmenty. Przenieść je do schłodzonego homogenizatora zawierającego bufor z inhibitorami RNaz i DNazami.

Homogenizuj tkankę optymalnie, aby uwolnić komórki do zawiesiny, selektywnie zachowując mikroglej ze względu na ich zdolność do wytrzymywania sił ścinających i utrzymywania żywotności błony, jednocześnie eliminując neurony i inne komórki glejowe.

Co więcej, inhibitory RNaz degradują RNazy, podczas gdy DNazy degradują wszelkie zanieczyszczające DNA.

Przepuść zawiesinę komórek przez sitko do komórek, aby usunąć resztki tkanek.

Przenieść zawiesinę komórek do probówki. Odwirować i usunąć sklarowany nad osadem zawierający enzymy. Ponownie zawieś komórki w buforze.

Dodaj mikrokulki magnetyczne anty-mielinowe. Te mikrogranulki celują w białko mieliny, wiążąc resztki mieliny i oligodendrocyty.

Załaduj mieszaninę komórek i kulek do kolumny zubożającej składającej się z matrycy z kulkami ferromagnetycznymi.

Pod wpływem przyłożonego pola magnetycznego resztki mieliny i oligodendrocyty związane z mikrokulkami są zatrzymywane w kolumnie, podczas gdy komórki mikrogleju przechodzą przez nią.

Przemyć kolumnę buforem i zebrać przepł