JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:46 min. • July 8th, 2025
Wysiewanie ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC) w bioreaktorze. Komórki iPS są ponownie zawieszane w pożywkach zawierających inhibitor apoptozy komórkowej.
Pod wpływem pola magnetycznego pionowe koło bioreaktora obraca się z kontrolowaną prędkością, ułatwiając kontakt komórka-komórka i tworzenie agregatów. Usuń większość pożywki i dodaj nową pożywkę bez inhibitora.
Kontynuuj hodowlę. Gdy agregaty osiągną optymalną wielkość, pozwól im osiąść grawitacyjnie. Usuń nośnik.
Dodać pożywkę różnicującą zawierającą czynniki wzrostu i kulturę o zmniejszonej prędkości koła bioreaktora. Czynniki wzrostu sprzyjają różnicowaniu neuronalnemu w obrębie agregatów.
Następnie dodaj świeżą pożywkę uzupełnioną czynnikami wzrostu i chemokinami, które indukują rozwój przodków móżdżku.
Stopniowo przodkowie móżdżku organizują się w odrębne warstwy w agregatach, tworząc wczesne organoidy móżdżku.
Na koniec dodaj pożywkę neuronalną zawierającą określone czynniki neurotroficzne.
Czynniki te indukują dojrzewanie progenitorów móżdżku do synaptycznie aktywnych funkcjonalnych neuronów móżdżku, generując dojrzałe organoidy.
W dniu 1, przy czym dzień 0 jest dniem wysiewu bioreaktora,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych