Izolacja neuronów DRG i kokultura z prekursorami komórek Schwanna w celu wytworzenia komórek Schwanna

Weźmy rdzeń kręgowy zarodka szczura z przyczepionymi zwojami korzenia grzbietowego lub DRG, zawierającymi neurony i komórki glejowe.

Odłącz poszczególne DRG od pępowiny, przenieś je do probówki i odwiruj, odrzucając wszelkie resztki tkanek.

Dodaj enzymy, aby zdysocjować neurony DRG i komórki glejowe.

Zakręć ogniwami i usuń wszelkie zanieczyszczenia. Dodaj neuronalną pożywkę podtrzymującą i rozcieraj, aby wytworzyć zawiesinę jednokomórkową.

Przenieś zawiesinę do mikropłytki pokrytej substratem hodowlanym, promując przyleganie komórek.

Wprowadzić pożywkę oczyszczającą i inkubować. Czynniki hamujące pożywki eliminują dzielące się komórki glejowe, podczas gdy niedzielące się neurony przeżywają.

Weźmy komórki podobne do komórek Schwanna lub SCLC w pożywce do wspólnej hodowli. SCLC, prekursor komórek Schwanna, oddziałuje z embrionalnymi neuronami nerwów obwodowych.

Wprowadzić zawiesinę do neuronów DRG i inkubować. Interakcja SCLC z neuronami DRG sprzyja ich dojrzewaniu do komórek Schwanna.

Wygenerowane komórki Schwanna są gotowe do analizy.

Aby pobrać zwoje korzenia grzbietowego, przenieś pierwszy zarodek do 10-centymetrowego naczynia hodowlanego zawierającego PBS o temperaturze pokojowe