Opracowanie zmodyfikowanego modelu 3D spolaryzowanej tkanki nerwowej na bazie jedwabiu

Umieść porowate jedwabne rusztowania w kształcie pączka, pokryte poli-D-lizyną, na płytce wielodołkowej.

Dodaj pożywkę hodowlaną, aby nawodnić rusztowania, ułatwiając przyczepianie komórek.

Odessać nadmiar pożywki. Wysiej rusztowania zawiesiną komórek neuronalnych i inkubuj.

Powlekana powierzchnia i pory rusztowania zapewniają dużą powierzchnię do mocowania komórek o dużej gęstości i ułatwiają wydajną dyfuzję składników odżywczych i odpadów.

Usuń nieprzyłączone komórki i dodaj kolagen, białko macierzy zewnątrzkomórkowej.

Inkubuj do polimeryzacji kolagenu. Proces ten osadza komórki w żelowej matrycy 3D na porowatym rusztowaniu.

Dodaj multimedia. Hodowla i regularna wymiana połowy pożywki hodowlanej w celu uzupełnienia składników odżywczych bez naruszania komórek.

W hodowli ciała komórek nerwowych pozostają zakotwiczone w rusztowaniu jedwabnym, podczas gdy aksony rosną przez macierz kolagenową, tworząc sieci aksonalne 3D.

To podzielone na przedziały ciało komórki i lokalizacja aksonalna powodują powstanie 3D spolaryzowanego modelu tkanki nerwowej przypominającego mózg

Wewnątrz kaptura do hodowli komórkowej umieść parę wysterylizowanych kleszczy, pożywki do hodowli komórkowych i autoklawowane rusztowania. Wyjmij 96-dołkową płytkę z opakowania i umieść ją w środku. Aby wysiać rusztowania, najpierw umieść jedno sterylne rusztowanie na studzience w 96-dołkowej płytce. Dodaj pożywkę do hodowli komórkowych, aby zanurzyć rusztowania i inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza w inkubatorze do hodowli tkankowych, aby je zrównoważyć przez co najmniej 30 minut.

Po inkubacji odessać nadmiar pożywki z rusztowań. Następnie dodaj 2 razy 10 do 6 komórek neuronalnych kory szczura w 100 mikrolitrach podłoża neurobazalnego na rusztowanie. Włożyć płytkę z powrotem do inkubatora i pozostawić na noc, aby komórki mogły przyczepić się do rusztowania. Następnego ranka ostrożnie odessać nieprzyłączone komórki i zastąpić 200 mikrolitrami świeżej pożywki do hodowli komórkowych. Inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez krótki czas.

Następnie odessać pożywkę ze studzienek. Za pomocą sterylnych kleszczy przenieś rusztowania zawierające komórki do pustych studzienek 96-dołkowej płytki. Następnie do każdego rusztowania dodaj 100 mikrolitrów świeżo rozcieńczonego, lodowatego roztworu kolagenu z ogona szczura w ilości 3 miligramów na mililitr

Umieść komórki z powrotem w inkubatorze o temperaturze 37 stopni Celsjusza, aby umożliwić polimeryzację kolagenu przez 30 minut. Wyjąć płytkę z inkubatora i dodać 100 mikrolitrów wstępnie podgrzanej pożywki do hodowli komórkowych do dołka. Umieść płytkę z powrotem w inkubatorze na żądany okres wzrostu komórek, zastępując połowę pożywki z każdej studzienki świeżą pożywką codziennie przez okres do jednego tygodnia.