Generowanie kultury organoidów z zawiesiny komórek guza mózgu

Zacznij od probówki mikrowirówkowej zawierającej bogatą w lamininę macierz zewnątrzkomórkową lub lrECM. Laminina jest składnikiem strukturalnym występującym obficie w mózgu.

Trzymaj probówkę na lodzie, aby zapobiec polimeryzacji IrECM.

Dodaj komórki guza mózgu i dokładnie wymieszaj, aby zapewnić równomierne rozmieszczenie komórek.

Następnie przenieś mieszaninę na formy parafilmowe, tworząc kropelki.

Inkubuj w celu ułatwienia polimeryzacji lrECM w celu utworzenia rusztowania, naśladując naturalne środowisko komórek.

Teraz przepłucz zestalone organoidy na szalkę Petriego zawierającą pożywkę hodowlaną, a następnie inkubuj.

Pożywka hodowlana dostarcza niezbędnych składników odżywczych i czynników wzrostu, wspomagając podział komórek.

W organoidzie komórki samoorganizują się poprzez migrację i inwazję.

Po inkubacji przechylić płytkę, aby osadzić organoidy.

Ostrożnie usuń nadmiar podłoża i dodaj świeże podłoże.

Inkubować z delikatnym potrząsaniem.

To równomiernie rozprowadza składniki odżywcze i zwiększa wzrost organoidów.

Aby wytworzyć organoidy z zawiesiny jednokomórkowej, dodaj odpowiednią ilość bogatej w lamininę macierzy zewnątrzkomórkowej lub lrECM do małej probówki wirówkowej w wi