Obsługa kultur neuronalnych komórek macierzystych w zakładzie produkcji komórek

Aby zminimalizować zanieczyszczenie w hodowlach neuronalnych komórek macierzystych, należy użyć urządzenia z kapturem laminarnym, komorą buforową, komorą procesową i komorą mikroskopu, z których każda jest oddzielona hermetycznymi drzwiami.

Teraz wlej wodę do płytki hodowlanej w inkubatorze, aby utrzymać wilgotność.

Dostosuj parametry komory buforowej, komory procesowej i inkubatora do optymalnych poziomów.

Oczyść wszystkie powierzchnie środkiem dezynfekującym i sterylną gazą, aby wyeliminować zanieczyszczenia mikrobiologiczne.

Umieść najpierw płytkę do hodowli neuronalnych komórek macierzystych w kapturze laminarnym, który zapewnia przefiltrowane powietrze.

Przetrzyj zewnętrzną część płytki gazą nasączoną etanolem, a następnie przenieś ją do komory buforowej, która zapewnia przefiltrowanemu powietrzu optymalny poziom gazu.

Na koniec przenieś płytkę przez komorę procesową do inkubatora i zamknij drzwiczki.

Po inkubacji przenieś płytkę hodowlaną z powrotem do komory procesowej wraz ze świeżą pożywką.

Zrównoważyć świeżą pożywkę.

Odśwież pożywkę na płytce hodowlanej i ponownie inkubuj płytkę.

Umieść trzy szalki Petriego w misce na wodę u podstawy każdego inkubatora. Napełnij te naczynia sterylną wodą i utrzymuj poziom wody w tych naczyniach, ponieważ mają one kluczowe znaczenie dla utrzymania nastawy wilgotności względnej w inkubatorze.

W interfejsie graficznym kliknij Inkubator. Następnie kliknij istniejącą wartość wilgotności względnej pod nastawą i wprowadź 85%. Następnie kliknij zielony znacznik wyboru, aby zaakceptować tę wartość.

Następnie należy dostosować komory buforowe, komorę procesową i inkubator do nastaw gazu wymaganych dla typu wprowadzanych komórek. Oczyść powierzchnię komory procesowej sterylną gazą i niepalnym środkiem dezynfekującym, takim jak produkty na bazie chlorku benzalkoniowego.

Następnie wyczyść rękawice i powierzchnie, które są często dotykane, takie jak klamki. Następnie oczyść powierzchnię okapu z przepływem laminarnym i komory buforowej 70% etanolem i pozostaw do wyschnięcia.

Następnie umieść kolbę lub płytkę z komórkami w kapturze i krótko przetrzyj jej zewnętrzną powierzchnię sterylną gąbką z gazy nasączoną etanolem. Następnie umieścić kolbę lub płytkę w komorze buforowej i uruchomić współczynnik rozcieńczenia. Po zakończeniu należy natychmiast przenieść kolbę lub płytkę do odpowiedniego inkubatora.

Ponieważ inkubator znajduje się z tyłu komory procesowej, należy wyciągnąć półkę do komory procesowej w celu umieszczenia komórek i unikać niepotrzebnego otwierania drzwi inkubatora lub przez dłuższy czas.

Na tym etapie przygotuj pożywkę do hodowli komórkowych. Pozwolić, aby pożywka zrównoważyła się z poziomami dwutlenku węgla i tlenu obecnymi w systemie, pozostawiając pojemnik na pożywkę lekko niezamknięty na 20 minut.

Następnie usuń stare podłoże z dołków. W przypadku pluripotencjalnych komórek macierzystych należy usunąć prawie całą starą pożywkę, pozostawiając niewielką ilość starej pożywki, aby zapobiec wysuszeniu podczas procesu karmienia. W przypadku nerwowych komórek macierzystych usuń połowę starego podłoża. Następnie dodaj świeżą pożywkę do płytek do kultur komórkowych i umieść płytki z powrotem w wyznaczonym inkubatorze.