Tworzenie i rozszerzanie neurosfer z tkanki hipokampa

Zacznij od postnatalnego zakrętu zębatego hipokampa myszy, tkanki mózgowej bogatej w nerwowe komórki macierzyste i progenitorowe o zdolności do samoodnawiania.

Dodaj enzymy trypsyny, które dysocjują macierz zewnątrzkomórkową tkanki, rozluźniając komórki.

Następnie usuń enzymy i kilkakrotnie umyj tkankę buforem.

Zastąp bufor pożywką do hodowli neuronów wzbogaconą w czynniki wzrostu.

Kilkakrotnie pipetować, aby zdysocjować tkankę i uwolnić komórki do pożywki.

Rozcieńczoną zawiesinę komórkową należy umieścić na niepowlekanej szalce Petriego i inkubować.

Komórki macierzyste i progenitorowe wykorzystują składniki odżywcze i czynniki wzrostu do namnażania się.

Z biegiem czasu spontanicznie się agregują, tworząc swobodnie unoszące się trójwymiarowe struktury zwane pierwotnymi neurosferami z niejednorodną populacją komórek.

Zbierz te neurosfery i odrzuć supernatant. Ponownie zawiesić neurosfery w pożywce do hodowli neuronów i dysocjować do zawiesiny jednokomórkowej.

Ponownie hoduj te komórki na niepowlekanej szalce Petriego, aby utworzyć wtórne neurosfery ze stosunkowo jednorodną populacją komórek.

Aby oddzielić próbki SVZ i DG, dodaj trypsynę-EDTA 0,05% do końcowego stężenia od 5% do 10%