Wspólna hodowla komórek Schwanna z neuronami DRG na wstępnie rozciągniętej błonie

Weź komorę krzemową przymocowaną do pokrytej matrycą, rozciągniętej membrany krzemowej.

Dodaj zwoje korzenia grzbietowego lub zawiesinę komórek DRG i inkubuj.

Macierz wspomaga przyłączanie i namnażanie komórek, podczas gdy rozciągnięta powierzchnia kieruje wyrównaniem aksonów.

Dodaj inhibitory wzrostu, które eliminują aktywnie dzielące się komórki glejowe, umożliwiając przetrwanie neuronom niedzielącym się.

Usuń nośnik. Dodaj pożywkę wzrostową i inkubuj.

Neuron wyczuwa zwiększoną sztywność błony w kierunku rozciągnięcia i odpowiednio orientuje wzrost aksonów.

Dodać wyhodowane i zebrane komórki Schwanna do kultury DRG i inkubować.

Komórki Schwanna przyczepiają się do zregenerowanego aksonu, izolując neuron.

Zwiększa to przeżywalność i funkcjonalność neuronów, ustanawiając wspólną kulturę.

Przed wysiewem neuronów DRG usuń roztwór PLL z komory. Spłucz powierzchnię PDMS sterylną wodą i wysusz ją na powietrzu. Po ponownym wywieszeniu ogniw pozostaw zawiesinę na 1 do 2 minut, aby zanieczyszczenia osiadły na dnie rurki. Następnie dodaj 1,5 mililitra zawiesiny komórkowej do każdej komory rozciągania i inkubuj ją w temperaturze 37 stopni Celsjusza z 5% CO₂ .

Aby wyeliminować komórki glejowe