Przygotowanie plastrów kollicyczno-wzgórzowo-korowych z mózgu szczeniaka myszy

Umieść mózg szczeniaka myszy na zjeżdżalni grzbietową stroną skierowaną do góry.

Przytnij przód mózgu i ustaw go na utworzonej płaskiej powierzchni.

Wyrównaj powierzchnię grzbietową i linię środkową mózgu na szkiełku. Wytnij pod kątem, aby wyrównać połączone słuchowe struktury śródmózgowia i przodomózgowia. Struktury te to wzgórek dolny lub IC, przyśrodkowe kolankowate ciało lub MGB, wzgórzowe jądro siatkowate lub TRN oraz kora słuchowa lub AC.

Przymocuj kątowo wyciętą powierzchnię mózgu do stolika na próbkę wibratomu za pomocą bloków agarowych, upewniając się, że tyłomózgowie jest podparte na cieńszym bloku.

Przenieś scenę do wibratomu i dodaj bufor, aby zapobiec uszkodzeniu tkanki.

Rozpocznij krojenie, aby zlokalizować IC, MGB, TRN i AC.

Pobrać wycinek zawierający połączone regiony, zwany wycinkiem kolkulo-wzgórzowo-korowym, i przenieść plasterek do komory trzymającej, aby zachować żywotność tkanki.

Aby przygotować etap cięcia do krojenia, wytnij mały kawałek 3% agaru o objętości około 1 centymetra sześciennego, który ma być użyty jako zabezpieczenie dla mózgu, oraz kolejny kawałek o wymiarach 1,5 centymetra na 1,5 milimetra na 3 milimetry, który zostanie użyty jako guzek do podparcia wzgórka dolnego.

Następnie przyklej backstop do sceny za pomocą kleju cyjanoakrylowego, a następnie przyklej wybrzuszenie po prawej stronie backstopu tak, aby tworzyły kąt 80 stopni. Na szkiełku oznaczonym dwiema liniami pod kątem 90 stopni i ukośną linią pod kątem 17 stopni od lewego górnego rogu do prawego dolnego rogu, umieść mózg grzbietową stroną do góry w punkcie przecięcia dwóch linii.

Za pomocą żyletki usuń od 2 do 4 milimetrów rostralnego końca mózgu, aby uzyskać płaską powierzchnię. Następnie umieść mózg ogonową do góry na nowo utworzonej płaskiej powierzchni. Wyrównaj grzbietową powierzchnię mózgu z linią poziomą, a linię środkową mózgu z pionową linią zaznaczoną na szkiełku. Następnie wyrównaj żyletkę z linią 17 stopni. Przechyl maszynkę do golenia pod kątem 30 stopni i usuń około 3 milimetry prawej kory w podwójnym ukośnym cięciu.

Aby zamontować mózg na etapie wibratomicznym, umieść mały kawałek bibuły filtracyjnej po brzusznej stronie mózgu, tak aby długi wymiar był prostopadły do linii środkowej. Ostrożnie nałóż niewielką ilość kleju cyjanoakrylowego na obszar przed ogranicznikiem i po lewej stronie wybrzuszenia. Następnie umieść podwójnie ukośnie przyciętą stronę mózgu na kleju, tak aby ogonowa część mózgu i tyłomózgowie były oparte o guzek, a prawa strona mózgu opierała się o backstop.

W tej procedurze szybko umieść etap cięcia w wibratomie. Wypełnij scenę roztworem do cięcia. Następnie wyrównaj ostrze z górną częścią mózgu. Usuń od 1 do 1,5 milimetra z czubka mózgu. Następnie pokrój i usuń więcej plasterków o wielkości od 300 do 500 mikrometrów, przesuwając się głębiej.

Gdy wzgórek dolny, ciało kolankowate przyśrodkowe i jądro kolankowate boczne są widoczne, zakręt zębaty powinien wyglądać jak kształt litery C, a struktura powinna być wyrównana. Uzyskaj około dwóch plasterków po 600 mikrometrów. Są to plastry kolikulo-wzgórzowo-korowe. Następnie przenieś je do komory przetrzymywania o temperaturze 32 stopni Celsjusza.