Ustanowienie pierwotnej hodowli komórek zwojów korzenia grzbietowego z kręgosłupa szczura

Weźmy kręgosłup szczura. Wykonaj dwa nacięcia wzdłuż jego boków i jedno cięcie boczne.

Usuń mięśnie grzbietowe i grzbietową część kręgów.

Wyciągnij rdzeń kręgowy.

Zidentyfikuj zwoje korzenia grzbietowego lub DRG, znajdujące się obustronnie wzdłuż kręgów lędźwiowych.

DRG zawierają neurony otoczone komórkami glejowymi.

Wytnij DRG i zbierz je do naczynia. Kilkakrotnie przemyj chusteczkę pożywką bez surowicy.

Przenieść DRG na płytkę zawierającą roztwór kolagenazy i inkubować. Kolagenaza degraduje macierz zewnątrzkomórkową.

Umyć buforem. Dodaj trypsynę-EDTA i inkubuj, aby przerwać połączenia komórka-komórka, rozluźniając komórki.

Przenieść DRG do probówki, odwirować i wyrzucić supernatant.

Ponownie zawiesić tkankę w pożywce hodowlanej i kilkakrotnie pipetować, aby uwolnić komórki.

Przenieś komórki na płytkę hodowlaną pokrytą polimerem, aby ułatwić przyczepienie.

Usuń pożywkę i dodaj nową pożywkę zawierającą inhibitory i czynniki wzrostu.

Inhibitory ograniczają proliferację komórek glejowych, podczas gdy czynniki wzrostu sprzyjają wzrostowi neuronów.

Zbierz zwoje korzenia grzbietowego lędźwiowego z pnia dwu- lub trzytygodniowego szczura. Zacznij od wykonania dwóch cięć wzdłuż boków kręgo