Rozwarstwienie i montaż eksplantatów mózgu larw muszki owocowej

Zacznij od larw Drosophila, muszki owocowej, w fizjologicznym roztworze soli fizjologicznej wewnątrz naczynia. Roztwór zapobiega odwodnieniu larw.

Pod mikroskopem preparacyjnym zlokalizuj przedni koniec larw za pomocą haczyków ustnych.

Przedni koniec zawiera dyski oczne i ośrodkowy układ nerwowy lub OUN, który składa się z płatów mózgowych i brzusznego rdzenia nerwowego.

Przytrzymaj tylny koniec larwy za pomocą kleszczy. Za pomocą kolejnej pary kleszczy pociągnij przedni koniec, aby usunąć narządy wewnętrzne.

Usuń jelito i przyczepione mięśnie, aby wyizolować OUN przyczepiony do krążków ocznych.

Aby zamontować eksplantat mózgu, przenieś wyekstrahowaną tkankę do roztworu soli fizjologicznej zamkniętego w barierze tłuszczowej na szklanym szkiełku.

Upewnij się, że grzbietowa strona eksplantatu jest skierowana do góry i uszczelnij tkankę szkiełkiem nakrywkowym. Eksplantat mózgu jest gotowy do analizy.

Aby pobrać mózg z larw Drosophila, pod mikroskopem preparacyjnym, użyj jednej pary kleszczy preparacyjnych z standardową końcówką numer 5, aby utrzymać próbkę larwy na miejscu, podczas gdy drugiej użyj do ostrożnego wypreparowania mózgu, zachowując dyski oczu, płaty mózgowe i brzuszny rdzeń nerwowy. Następnie usuń przyczepione mięśnie, aby zminimalizować ruch próbki podczas obrazowania. Kiedy wszystkie mózgi zostaną pobrane, użyj smaru próżniowego, aby narysować kwadratową komorę na szklanym szkiełku i dodaj 20 mikrolitrów zewnętrznego roztworu soli fizjologicznej do komory.

Użyj kleszczy, aby przenieść mózgi do komory i dostosuj pozycje mózgów pod mikroskopem, stroną grzbietową skierowaną do góry. Przykryj komorę szklanym szkiełkiem nakrywkowym i delikatnie dociśnij szkiełko nakrywkowe, aby zmniejszyć dryf próbki podczas procedury obrazowania.