Technika zadawania urazowego uszkodzenia mózgu u muchówek Drosophila

Przejmij kontrolę i przetestuj dorosłe muchy Drosophila pod narkozą.

Umieść muchę testową w uchwycie i delikatnie postukaj w nią, aby umieścić głowę muchy poza końcówką. Upewnij się, że aparaty gębowe i ciało muchy pozostają wewnątrz uchwytu, aby uniknąć obrażeń niedocelowych.

Przymocuj uchwyt do urządzenia zaczepiającego z głową muchy skierowaną w dół.

Urządzenie jest podłączone do kontrolowanego źródła gazu i zawiera impaktor napędzany gazem, który powoduje obrażenia.

Dostarcz wybuch gazu, aby napędzać impaktor i uderzyć w głowę muchy, wywołując uraz mózgu w zamkniętej głowie bez uszkodzenia zewnętrznego.

Powstały stres mechaniczny uszkadza neurony, upośledzając ich funkcję.

Odłącz uchwyt, aby uwolnić muchę, a następnie przenieś go do fiolki w celu odzyskania.

W przypadku muchy kontrolnej zastosuj wybuch gazu bez uderzania w niego impaktorem.

Muchy kontrolne i testowe są teraz gotowe do oceny wpływu urazu.

Znieczulenie pojedynczej dwudniowej dorosłej samicy muchy za pomocą dwutlenku węgla.

Z podkładki z dwutlenkiem węgla użyj cienkiej szczoteczki, aby delikatnie przenieść muchę do uchwytu.

Następnie delikatnie postukaj w uchwyt, aż główka wystaje z końcówki.

Jeśli trąbka jest odsłonięta, użyj 1-mililitrowej igły strzykawki, aby delikatnie wsunąć ją z powrotem do końcówki. Bardzo ważne jest, aby korpus muchy, zwłaszcza część ustnika, znajdował się wewnątrz uchwytu. W przeciwnym razie mucha może umrzeć z powodu uszkodzenia narządów wewnętrznych lub niemożności spożycia pokarmu.

Następnie ustaw ciśnienie gazu na 100 kilopaskali i dostosuj przepływ w razie potrzeby. Po załadowaniu muchy dokręć uchwyt do cylindra strzykawki za pomocą łącznika, tak aby głowica muchy była skierowana w dół.

Następnie, za pomocą przełącznika, wyślij impuls gazu, który porusza impaktorem, aby uderzył w muchę raz i tylko raz.

Teraz odłącz uchwyt na muchę i wrzuć muchę z powrotem na podkładkę z dwutlenkiem węgla.

Muchę należy przelać do pustej fiolki, aż wyzdrowieje.

Zachowaj jedną muchę na fiolkę. Rekonwalescencja trwa tylko kilka minut.

Powtórz proces, aby przetestować cztery muchy na grupę eksperymentalną. Przetwarzanie dwóch grup, testu i pozoru, powinno zająć tylko od 20 do 30 minut. należy traktować tak samo jak zwierzęta doświadczalne, z wyjątkiem tego, że w rurze impaktora nie należy umieszczać bariery aerozolowej.