JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:00 min. • July 8th, 2025
Weźmy znieczuloną mysz z mikroranami na opuszkach stóp, które odsłaniają warstwę podstawną, najgłębszą warstwę naskórka.
Warstwa ta zawiera obwodowe włókna nerwowe połączone ze zwojami korzenia grzbietowego lub DRG w pobliżu rdzenia kręgowego.
Nałóż inokulum wirusa wścieklizny rzekomej, który atakuje układ nerwowy, na ranę i przetrzyj ją trzonkiem igły, aby zwiększyć adsorpcję.
Wirus wiąże się z receptorami na powierzchni komórki, co pozwala wirusowi wejść i rozpocząć replikację.
Cząsteczki wirusa rozprzestrzeniają się na pobliskie komórki i dostają się do nerwów obwodowych.
Wirus następnie przemieszcza się do DRG i rozprzestrzenia się przez rdzeń kręgowy do mózgu, infekując neurony.
Zainfekowane neurony uwalniają DAMPs, aktywując rezydentny mikroglej, który wydziela cytokiny i chemokiny w celu przyciągnięcia makrofagów i neutrofili.
Te komórki odpornościowe uwalniają reaktywne formy tlenu i enzymy proteolityczne, które uszkadzają neurony, prowadząc do zapalenia nerwów.
Miejscowo nanieść 20 mikrolitrów odpowiedniego miana inokulum wirusa na startą opuszkę stopy. Przeprowadzać próbne szczepienia pożywką tylko w startych opuszkach stóp zwierząt kontrolnych równolegle. Po każdej aplikacji delikatnie przetrzyj opuszkę stopy 10 razy trzonkiem igły, aby ułatwić wchłanianie wirusa co 10 minut przez 30 minut. Gdy starta opuszka stopy wyschnie, pozwól myszom wyzdrowieć z monitorowaniem aż do opadnięcia mostka przed umieszczeniem zwierząt w indywidualnych klatkach w celu obserwacji klinicznej i pobrania próbek.