Indukcja zapalenia nerwów u myszy poprzez wstrzyknięcie włókien alfa-synukleiny

Ustaw transgeniczną mysz w pozycji grzbietowej. Mysz wykazuje ekspresję zmutowanej formy białka alfa-synukleiny, która jest podatna na agregację.

Weź zawiesinę włókienek alfa-synukleiny, agregatów nieprawidłowo sfałdowanego białka alfa-synukleiny.

Wstrzyknąć włókienka do jamy otrzewnej, aby umożliwić ich ogólnoustrojową dystrybucję.

Po dostaniu się do krwiobiegu fibryle docierają do ośrodkowego układu nerwowego i wiążą się z komórkami śródbłonka bariery krew-mózg.

Fibryle są transportowane przez pęcherzyki przez komórki i dostają się do tkanki nerwowej. Następnie atakują neurony poprzez endocytozę i promują agregację zmutowanych białek alfa-synukleiny.

Agregaty te są uwalniane przez egzocytozę i rozprzestrzeniają się do sąsiednich neuronów, mikrogleju i astrocytów.

Rozpoznanie agregatów powoduje, że mikroglej uwalnia reaktywne formy tlenu, które uszkadzają tkankę, oraz cytokiny, które rekrutują dodatkowe komórki odpornościowe. Powoduje to zapalenie nerwów, które prowadzi do śmierci komórek nerwowych.

Pozwól myszy dojść do siebie, aby ocenić zapalenie nerwów za pośrednictwem alfa-synukleiny.

W przypadku wstrzyknięć dootrzewnowych należy krótko odnarkotyzować zwierzęta w komorze anestezjologicznej izofluranem. Ponownie uszczypnij palec u nogi zwierzęcia i upewnij się, że nie wycofuje tylnej kończyny, aby zapewnić prawidłowe znieczulenie. Napełnij jednorazową strzykawkę podskórną o rozmiarze 27 50 mikrolitrami sonikowanych włókien alfa-synukleiny lub PBS.

Trzymaj zwierzę w pozycji grzbietowej, z głową skierowaną w stronę przeciwną do badacza i w dół pod kątem około 45 stopni. Wstrzykiwać bezpośrednio do otrzewnej myszy bez przenikania do jelita cienkiego lub jelita ślepego znajdującego się za ścianą brzucha. Monitoruj zwierzęta, dopóki nie wyzdrowieją ze znieczulenia.