Generowanie urazu kłutego kory mózgowej w modelu myszy w celu wywołania astrogleju reaktywnego

Zabezpiecz znieczuloną mysz w stereotaktycznej ramce.

Ogol głowę i zdezynfekuj miejsce. Nałóż maść do oczu, aby zapobiec wysuszeniu rogówki.

Wykonaj nacięcie, aby odsłonić czaszkę.

Usuń leżące membrany i oczyść powierzchnię solą fizjologiczną.

Zaznacz obszar na czaszce, celując w korę mózgową.

Wywierć wzdłuż zaznaczonego obszaru. Zastosuj sól fizjologiczną, aby utrzymać nawilżenie tkanek.

Usuń poluzowany kawałek kości, odsłaniając leżącą pod nim korę.

Umieść piankę żelową nasączoną solą fizjologiczną, aby zapobiec wysuszeniu tkanek i wchłonąć krew.

Umieść sterylne ostrze przymocowane do uchwytu sondy nad korą. Następnie usuń piankę żelową.

Opuść ostrze, aby przeniknąć do kory i przesuwaj je poziomo w powtarzających się pociągnięciach, aby spowodować uraz mechaniczny.

Zdejmij ostrze i użyj pianki żelowej, aby wchłonąć krew. Zszyj nacięcie chirurgiczne.

W miejscu uszkodzenia astrocyty przechodzą reaktywną glejozę, w której aktywują się i namnażają, uwalniając cząsteczki ochronne, które zmniejszają stan zapalny i wspomagają naprawę tkanek.

W tym kroku umieść w pełni uspokojoną mysz w ramce stereotaktycznej. Zabezpiecz nos w stożku nosowym, który jest połączony z izofluranem. Następnie dokręć nauszniki i upewnij się, że głowa jest stabilna.

Ogol głowę od poziomu oczu do poziomu uszu. Następnie wysterylizuj skórę trzema naprzemiennymi peelingami z roztworem alkoholu izopropylowego i jodu betadyny. Następnie nałóż maść na oba oczy, aby zapobiec ich wysuszeniu.

Monitoruj głębokość znieczulenia zwierzęcia, ściskając go u palca u nogi lub ogona. Mysz znajduje się w odpowiedniej płaszczyźnie operacyjnej, gdy nie ma odpowiedzi, a oddech jest powolny i równomierny. Wykonaj przystrzałkowe nacięcie skóry od tuż za oczami do prawie punktu między uszami w jednym mocnym cięciu. Odsuń skórę na bok i przytnij prawą stronę hemostatem.

Pod mikroskopem oczyść leżącą na czaszce błonę za pomocą strony skalpela i aplikatorów z bawełnianą końcówką. Następnie oczyść czaszkę aplikatorem z bawełnianą końcówką zamoczonym w 0,9% roztworze soli fizjologicznej i pozostaw do całkowitego wyschnięcia. Za pomocą małej linijki i markera permanentnego zaznacz przednią granicę kraniotomii na wysokości 1 milimetra ogonowego do szwu koronalnego, a następnie zaznacz lewą krawędź kraniotomii na 1 milimetr bocznie do szwu strzałkowego.

Następnie zaznacz prawą i ogonową granicę kraniotomii w odległości 4 milimetrów od szwów strzałkowych i koronalnych. Za pomocą wiertła 0,5 ostrożnie wywierć kontur markera permanentnego i uważaj, aby całkowicie nie przebić się przez czaszkę. Delikatnie dociśnij wyizolowany kawałek kości ciemieniowej kleszczami. Przerzedzona kość jest gotowa do usunięcia, gdy jest wystarczająco słaba na obwodzie.

Teraz, za pomocą 10-mililitrowej strzykawki wyposażonej w igłę o rozmiarze 23, nałóż niewielką ilość 0,9% soli fizjologicznej na izolowaną kość i wywiercony obszar. Przymocuj ramię manipulatora do aparatu stereotaktycznego. Następnie przymocuj nowe ostrze skalpela do uchwytu sondy ostrą stroną skierowaną do przodu.

Trzymając ramię manipulatora z dala od drogi, ostrożnie podnieś kawałek kości za pomocą kątowych kleszczy, wkładając końcówkę z boku kości i ściągając ją jednym ruchem. Następnie umieść mały kawałek nasączonej wchłanialnej pianki żelowej na odkrytym mózgu, aby zapobiec jego wysuszeniu i wchłonąć krew, która może być obecna. Po umieszczeniu pianki żelowej na mózgu, odchyl ramię manipulatora na miejsce. Wyreguluj ostrze tak, aby wyśrodkowało się nad pianką żelową.

Następnie usuń piankę żelową i opuść ostrze, aż końcówka dotknie opony twardej, nie przebijając jej. Zaznacz współrzędne grzbietowo-brzuszne za pomocą skali noniusza na pionowym ramieniu ramy stereotaktycznej. Następnie, za pomocą ramienia manipulatora, powoli opuść ostrze dokładnie 3 milimetry w głąb mózgu. Pozwól ostrzu pozostać na miejscu przez 5 do 10 sekund.

Następnie powoli przesuń ramię stereotaktyczne z ostrzem w kierunku rostralno-ogonowym trzy razy. Pozwól ostrzu dotrzeć do rostralnych i ogonowych granic kraniotomii, zanim przejdziesz do przeciwnego końca. Następnie powoli podnieś ramię stereotaktyczne i wyjmij ostrze z mózgu.

Natychmiast umieść kolejny kawałek pianki żelowej na powierzchni mózgu, aby wchłonąć nadmiar krwi lub płynu. W międzyczasie zdejmij ramię stereotaktyczne i wyrzuć ostrze skalpela. Po ustaniu krwawienia usuń piankę żelową.

Zamknij ranę, zszywając skórę niewchłanialnymi szwami, takimi jak Ethilon lub Prolene, i usuń szwy 9 do 10 dni po zabiegu. Następnie podawaj podskórnie od 0,5 do 1 mililitra roztworu Ringera z mleczanami, aby zapewnić nawodnienie.