Indukcja dyskinez wywołanych lewodopą w szczurzym modelu choroby Parkinsona

Weź strzykawkę wypełnioną lewodopą, prekursorem dopaminy i inhibitorem konwersji dopaminy.

Wstrzyknij ten roztwór do tkanki podskórnej skrępowanego szczura z chorobą Parkinsona, wykazującego uszkodzone neurony wytwarzające dopaminę.

U szczura inhibitor wiąże się z enzymami wytwarzającymi dopaminę i zapobiega przedwczesnej przemianie lewodopy w dopaminę.

Lewodopa dostaje się do krwiobiegu, przekracza barierę krew-mózg przez kanały aminokwasowe i dostaje się do nieuszkodzonych neuronów wytwarzających dopaminę.

Enzymy w tych neuronach przekształcają lewodopę w dopaminę, neuroprzekaźnik pobudzający, i uwalniają ją do synapsy.

Dopamina wiąże się ze swoimi receptorami na neuronach postsynaptycznych, wyzwalając przekazywanie sygnału.

Powtarzaj zastrzyki okresowo, aby zwiększyć produkcję dopaminy.

Z biegiem czasu nadmiar dopaminy prowadzi do nadmiernej stymulacji jej receptorów i nadmiernej sygnalizacji neuronalnej, co ostatecznie zakłóca ruchy ciała szczura.

Umieść szczura w klatce i obserwuj jego zachowanie. Szczur wykazuje mimowolne, powtarzające się ruchy ciała, znane jako dyskinezy, wywołane przez lewodopę.

Przed wstrzyknięciem L-DOPA dodaj odpowiednią objętość sterylnego soli fizjologicznej do wstępnie zważonej, liofilizowanej mieszaniny L-DOPA i benzerazydu w bursztynowej fiolce i dobrze wstrząsaj przez 10 sekund. Bezpośrednio po przygotowaniu należy napełnić wymaganą objętość mieszaniny L-DOPA-benzerazydu dla każdego zwierzęcia w osobnych strzykawkach, zamontowanych za pomocą igły o rozmiarze 26 G i oznaczyć każdą strzykawkę indywidualnym identyfikatorem zwierzęcia.

Po umieszczeniu pierwszej klatki na stole do wstrzykiwań, należy wyjąć szczura z klatki i umieścić go na powierzchni iniekcji. Użyj ręki niedominującej, aby przytrzymać głowę i ramiona szczura dłonią przy powierzchni, a kciukiem i palcem wskazującym posmaruj skórę z tyłu pokrywającą łopatki. Użyj dominującej ręki, aby wstrzyknąć objętość L-DOPA do podskórnej przestrzeni między palcami, trzymając igłę równolegle do ciała, aby uniknąć wstrzyknięcia domięśniowego.

Po wstrzyknięciu przenieść szczura do klatki. Następnie ustaw minutnik na jedną do dwóch minut i powtórz procedurę, wstrzykując jednego szczura co jedną do dwóch minut, aż wszystkie szczury zostaną wstrzyknięte. W dniu oceny umieść zegar obok klatki, aby obserwować dyskinezę wywołaną lewodopą lub intensywność zachowania LID, jednocześnie szacując częstotliwość dowolnego zachowania w okresie oceny.

Oceń intensywność i częstotliwość ruchów dyskinezy dystonicznej i hiperkinetycznej, w tym początkowy początek zachowania LID, zachowanie szczytowe i fazę spadku w żądanej liczbie punktów czasowych. Jeśli używasz jednominutowych interwałów oceny, ustaw timer na jedną minutę, aby ocenić pierwszego szczura, i kontynuuj ocenę dla wszystkich szczurów w jednominutowych odstępach.